华中科技大学学报（医学版） ›› 2025, Vol. 54 ›› Issue (6): 804-811.doi: 10.3870/j.issn.1672-0741.25.05.025
摘要： 摘要:目的 探讨脂肪量和肥胖相关蛋白(obesity-associatedprotein,FTO)介导的 X-框结合蛋白1(X-boxbindingprotein1,XBP1)N6腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化修饰在姜黄素诱导的 Huh7肝癌细胞凋亡中的作用及机制。方法 (1)采用不同浓度(0、5、10、20、40、60μmol/L)姜黄素处理 Huh7细胞48h,CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡水平;Westernblot检测细胞中 FTO、XBP1及凋亡相关蛋白 Bax、Bcl-2、cleavedCaspase-3表达水平;甲基化 RNA 免疫共沉淀法检测各组细胞中 XBP1RNA m6A 甲基化水平。(2)将 FTO 干扰片段(si-FTO)及其阴性对照(si-NC)、FTO 过表达质粒(oe-FTO)及其阴性对照(Vector)转染至 Huh7细胞中,再联合20μmol/L姜黄素或160μmol/L甲基化抑制剂3-脱氮腺苷(3-deazaadenosine,3-DAA)处理48h,qRT-PCR 法检测细胞中 FTO 和 XBP1mRNA 表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;甲基化 RNA 免疫共沉淀法检测细胞中 XBP1RNA m6A 甲基化水平;放线菌素 D实验检测细胞 XBP1mRNA 半衰期;Westernblot检测细胞中 FTO、XBP1、cleavedCaspase-3等蛋白表达水平。结果 不同浓度姜黄素干预可显著抑制 Huh7 细 胞 存 活,诱 导 细 胞 凋 亡(均 P<0.05);同 时,上 调 细 胞 中 Bax、cleavedCaspase-3蛋白表达水平和 XBP1RNAm6A 甲基化水平,下调Bcl-2、FTO 和 XBP1蛋白表达水平(均P<0.05)。沉默 FTO 基因可诱导 Huh7细胞凋亡,提高细胞中 XBP1RNAm6A 甲基化水平,缩短 XBP1mRNA 半衰期,下调 XBP1mRNA 和蛋白表达水平(均P<0.05)。然而,3-DAA 干预显著逆转 FTO 基因沉默介导 XBP1mRNA m6A 修饰诱导的Huh7细胞凋亡;同时,过表达 FTO 显著逆转姜黄素对 Huh7细胞凋亡的诱导作用。结论 姜黄素可通过下调 FTO 表达,抑制 XBP1m6A 去甲基化,进而促进 XBP1mRNA 和蛋白降解,诱导肝癌细胞凋亡。
