华中科技大学学报（医学版） ›› 2025, Vol. 54 ›› Issue (6): 812-820.doi: 10.3870/j.issn.1672-0741.25.05.031
摘要： 摘要:目的 探讨 NOP2/SunRNA 甲基转移酶2(NSUN2)通过介导 TEA 结构域转录因子1(TEAD1)5-甲基胞嘧啶(m5C)甲基化修饰对胃癌(gastriccancer,GC)细胞糖酵解的影响及其机制。方法 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测人胃癌(GC)组织中 NSUN2和 TEAD1mRNA 表达水平,Pearson相关分析两者相关性。qRT-PCR 和蛋白质印迹法(Westernblot)检测人正常胃黏膜上皮细胞 GES-1及胃癌 AGS、HGC-27、SNU-1和 MKN-45等细胞系中 NSUN2表达水平。将 NSUN2干扰慢病毒(sh-NSUN2)及其阴性对照sh-NC、TEAD1过表达质粒(oe-TEAD1)及其阴性对照(Vec-tor)分别或同时转染至
HGC-27细胞中,CCK-8检测细胞增殖活性。葡萄糖摄取、乳酸含量以及三磷酸腺苷(ATP)检测试剂盒评估细胞糖酵解。Westernblot检测细胞中糖酵解途径相关蛋白(HK2、LDHA、GLUT1)表达水平。qRT-PCR和 Westernblot检测细胞中 TEAD1mRNA 和蛋白表达水平。RNA 测序(RNA-seq)和 RNA 甲基化免疫共沉淀实验筛选 NSUN2的5-甲基胞嘧啶(m5C)修饰靶点,同时采用斑点杂交和双荧光素酶报告基因实验验证其调控功能。结果 与癌旁组织比较,GC 组 织 中 NSUN2 和 TEAD1 mRNA 表 达 水 平 均 显 著 升 高 (均 P<0.05),且 两 者 呈 正 相 关 (r=0.3266,P<0.05)。与 GES-1细胞系比较,胃癌细胞系(AGS、HGC-27、SNU-1和 MKN-45)中 NSUN2mRNA 和蛋白表达水平显著升高,其中在 HGC-27细胞系中表达最高(均P<0.05)。沉默 NSUN2可显著降低 HGC-27细胞增殖活性和糖酵解,下调 HK2、LDHA 和 GLUT1蛋白表达水平,同时细胞中 TEAD1 mRNA 和蛋白表达水平显著降低(均 P<0.05)。TEAD1是 NSUN2调控的潜在靶点,沉默 NSUN2通过 m5C 修饰的方式降低 TEAD1的表达(P<0.05)。然而,过表达 TEAD1可明显逆转沉默 NSUN2对 HGC-27细胞增殖活性和糖酵解的抑制作用。结论 NSUN2通过 m5C依赖性的方式增强 TEAD1的表达进而促进 GC细胞的糖酵解。
