目的 基于 Wnt 信号通路探讨原花青素改善骨质疏松症的作用与分子机制。 方法 取 50 只 SD 雌性大鼠通过卵巢切除术构建骨质疏松症大鼠模型, 将建模成功的大鼠随机分为模型组、 阿仑膦酸钠组和 原花青素低、 中、 高剂量组。 另取 10 只 SD 大鼠记为对照组, 对照组仅翻动双侧卵巢不做切除。 阿仑膦酸 钠组按 1 mg / kg 灌胃给予阿仑膦酸钠; 原花青素低、 中、 高剂量组分别按 15、 25、 35 mg / kg 灌胃给予原花 青素; 对照组、 模型组分别灌胃给予等量生理盐水。 酶联免疫测试法 (ELISA) 测定各组大鼠血清氧化应 激相关指标 [丙二醛 (MDA)、 超氧化物歧化酶 (SOD)、 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)] 水平和骨代谢 指标 [抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)、 Ⅰ型胶原羧基末端肽 (PICP)、 血清骨钙素 (BGP)] 含量; 骨密度 扫描仪扫描检测各组大鼠股骨的骨密度 (BMD) 值; 苏木素-伊红 (HE) 染色观察各组大鼠骨组织形态学 变化; 实时荧光定量聚合酶链式反应 (RT-PCR) 和蛋白免疫印迹法 (WB) 检测骨组织 Wnt、 β-连环蛋白 (β-catenin)、 成骨标志蛋白 [Runt 相关转录因子 2 (Runx2)、 Osterix] mRNA 和蛋白表达。 结果 与对照 组比较, 模型组、 阿仑膦酸钠组和原花青素低、 中、 高剂量组大鼠血清 MDA、 TRAP 升高, SOD、 GSH-Px、 PICP、 BGP 降低 (P< 0. 05); 与模型组比较, 阿仑膦酸钠组和原花青素低、 中、 高剂量组大鼠股骨血清 MDA、 TRAP 降低, SOD、 GSH-Px-PICP、 BGP 升高 (P< 0. 05)。 对照组大鼠骨小梁呈网状排列、 连接紧 密。 模型组骨小梁数量降低、 排列稀疏紊乱、 连续性差。 与模型组比较, 阿仑膦酸钠组和原花青素低、 中、 高剂量组骨小梁数量及结构上均存在不同程度的改善。 与对照组比较, 模型组、 阿仑膦酸钠组和原花青素 低、 中、 高剂量组大鼠骨组织 Wnt、 β-catenin、 Runx2、 Osterix mRNA 及蛋白表达均降低 (P< 0. 05), 与模 型组比较, 阿仑膦酸钠组和原花青素低、 中、 高剂量组大鼠骨组织 Wnt、 β-catenin、 Runx2、 Osterix mRNA 及蛋白表达均升高 (P< 0. 05)。 结论 原花青素能有效改善骨质疏松症大鼠氧化应激和骨代谢指标, 发挥 治疗骨质疏松症的作用, 推测是通过调控 Wnt 通路抑制过氧化应激反应, 促进 Wnt、 β-catenin 及成骨标志 蛋白 Runx2、 Osterix 的表达实现此作用的。

目的 探究在 CXC 基序趋化因子配体 8 (CXC motif chemokine ligand 8, CXCL8) 在口腔鳞癌 (oral squamous cell carcinoma, OSCC) 中的作用。 方法 实时荧光定量 PCR (quantitative real-time PCR, RT-qPCR) 和 Western 印迹检测 OSCC 组织和细胞中 CXCL8 的表达; 分析 CXCL8 表达与 OSCC 患者临床病理特 征的相关性; 细胞计数试剂盒 8 (cell counting kit-8, CCK-8), 克隆形成、 流式细胞术、 划痕实验、 Transwell 实验和 Western 印迹检测 CXCL8 敲低对细胞增殖、 凋亡、 迁移、 侵袭和上皮间质转化 (epithelial-mesenchymal transition, EMT) 的影响。 结果 CXCL8 在 OSCC 组织和细胞中的表达显著上调。 CXCL8 高水平 与肿瘤大小、 TNM 分期和远处转移显著相关。 CXCL8 的敲低可以抑制 SCC9 细胞增殖、 迁移、 侵袭和 EMT, 促进细胞凋亡。 结论 CXCL8 在 OSCC 中高表达, 敲低其表达可抑制 SCC9 细胞的增殖和转移。

目的 探讨缺氧诱导因子 1α (hypoxia inducible factor 1α, HIF-1α) 基因干扰对高糖 (HG) 诱导 的肾小管上皮细胞 (HK-2) 凋亡、 炎症和细胞外基质 (ECM) 沉积的影响。 方法 将 HK-2 细胞分为 4 组: 对照组; HG 组; HG + shRNA-NC 组; HG + HIF-1α-shRNA 组。 按分组处理细胞后, 实时定量聚合酶链 反应检测 HIF-1α 和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 (NGAL) 的表达水平; 细胞计数试剂盒 8、 流式 细胞术和酶联免疫吸附试验分别检测细胞增殖、 凋亡和炎性因子的含量; 免疫印迹检测蛋白表达。 结果 与 HG 组相比较, HG + HIF-1α-shRNA 组 HIF-1α 和 NGAL mRNA 和蛋白表达水平降低, 细胞增殖倍数升高, 细胞凋亡率降低, 白细胞介素-6 (IL-6) 和肿瘤坏死因子-α 水平降低, IL-10 水平升高, 组织金属蛋白酶抑 制物 l 和 I 型胶原蛋白表达水平降低, 基质金属蛋白酶 9 蛋白表达水平升高 (P< 0. 01)。 结论 HIF-1α 基 因干扰缓解 HG 诱导的 HK-2 细胞凋亡、 炎症和 ECM 沉积。 

目的 探讨 PTEN-Long 在胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞 ( SGC-7901) 增殖、 凋亡的影响。 方法 RT-qPCR 与 Western 免疫印迹检测胃癌细胞中 PTEN-Long mRNA 及蛋白表达水平, 选择最佳干预细 胞系, 将携带 PTEN-Long 基因的重组慢病毒载体转染 SGC-7901 细胞 (PTEN-Long 组), 转染空载慢病毒作 为 NC 组, 未转染细胞作为 Control 组, 检测转染效率; MTT 法与 Edu 染色检测细胞增殖; 流式细胞仪检测 细胞周期与细胞凋亡; Western 免疫印迹检测 P27、 cyclin D1 及 PI3K/ AKT 通路相关蛋白表达。 结果 PTEN-Long mRNA 及蛋白在胃癌细胞表达水平显著降低 (P< 0. 05), 在 SGC-7901 细胞中表达水平最低, 选 择 SGC-7901 细胞进行后续实验; RT-qPCR 与 Western 免疫印迹证实慢病毒转染成功; 与 Control 组和 NC 组 相比, PTEN-Long 组细胞增殖活性显著降低, G0 / G1 期的细胞比例显著升高, G2 / M、 S 期细胞比例显著降 低 (P< 0. 05), 细胞凋亡率显著升高, P27 蛋白表达水平显著升高, p-PI3K、 p-AKT、 Cyclin D1 蛋白表达 水平显著降低 (P< 0. 05)。 结论 PTEN-Long 在胃癌中下调表达, 过表达 PTEN-Long 可通过抑制 PI3K/ AKT 信号通路激活抑制胃癌细胞增殖, 促进细胞凋亡。

目的 利用表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor, EGFR) 突变非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 细胞探究程序性细胞死亡配体 1 (programmed cell death ligand 1, PD-L1) 在埃克替尼抗性中的潜在作用。 方法 采用实时荧光定量 PCR ( qRT-PCR) 和 Western 印迹检测 A549、 HCC827 和 PC-9 细胞中 p-EGFR 和 PD-L1 的表达水平。 MTT 方法评估 HCC827 和 PC-9 细胞对埃克替 尼的敏感性。 采用 PD-L1 敲除来评估对埃克替尼敏感性的影响, 并使用小鼠异形移植模型进行体内实验。 结果 与 A549 细胞比较, HCC827 和 PC-9 细胞中 p-EGFR 和 PD-L1 水平较高。 埃克替尼对 HCC827 和 PC-9 细胞增殖有显著的抑制作用, 并激活细胞凋亡。 敲除 PD-L1 显著降低了埃克替尼对 HCC827 和 PC-9 细胞的 抑制作用。 与 sh-NC + 埃克替尼组比较, PD-L1 敲除在体内降低对埃克替尼的敏感性。 结论 埃克替尼对 EGFR 突变 NSCLC 细胞有抑制作用, PD-L1 有助于 EGFR 突变 NSCLC 细胞对埃克替尼的敏感性。

目的 分析 miR-3682-3p 与 PI3K/ AKT 信号通路在肝细胞癌发展中的关系, 以期为肝细胞癌的治 疗提供新的思路。 方法 通过 qRT-PCR 分析 MIHA 人正常肝细胞和 SMMC-7721 人肝癌细胞中 miR-3682-3p 与 PI3K/ AKT 的表达水平。 通过转染不同质粒将 SMMC-7721 人肝癌细胞分为 miR-3682-3p mimic 组、 miR-3682-3p mimic NC 组、 miR-3682-3p inhibitor 组和 miR-3682-3p inhibitor NC 组, 采用双荧光素酶报告基因实验 分析 miR-3682-3p 与 PI3K 的相互作用关系。 采用蛋白免疫印迹、 qRT-PCR、 流式细胞术、 细胞划痕和 Transwell 实验分析不同实验组细胞的增殖、 侵袭和凋亡情况。 结果 miR-3682-3p 能够靶向调控 PI3K/ AKT 信号 通路, miR-3682-3p 表达能够激活 PI3K/ AKT 信号通路, 肝癌细胞的增殖、 迁移和侵袭能力增强, 凋亡减 少。 而抑制 miR-3682-3p 表达后, PI3K/ AKT 通路受到抑制, 肝癌细胞的增殖、 迁移和侵袭能力减弱, 凋亡 增加。 结论 PI3K 是 miR-3682-3p 的直接靶点, miR-3682-3p 通过激活 PI3K/ AKT 通路促进 SMMC-7721 人肝 癌细胞的体外转移活性。

目的 探讨 PCA3 对霍奇金淋巴瘤细胞 L428 增殖和凋亡的影响及可能机制。 方法 收集 39 例霍 奇金淋巴瘤患者淋巴瘤组织和正常瘤旁组织, RT-qPCR 检测组织中 PCA3 和 miR-185 表达水平。 体外培养 淋巴瘤 L428 细胞, 分为 si-NC 组、 si-PCA3 组、 si-PCA3 + NC 组、 si-PCA3 + miR-185 inhibitor 组, CCK-8 法 检测细胞增殖, 流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡, RT-qPCR 法检测 PCA3 和 miR-185 表达水平。 双荧 光素酶报告基因实验验证 PCA3 和 miR-185 的调控关系。 结果 淋巴瘤组织中 PCA3 的表达升高, miR-185 的表达降低 (P< 0. 05); 转染 si-PCA3 可抑制细胞增殖, 阻滞细胞周期, 促进细胞凋亡。 PCA3 靶向负调控 miR-185 表达。 共转染 si-PCA3、 miR-185 inhibitor 可降低转染 si-PCA3 对细胞增殖、 细胞周期、 凋亡的作 用。 结论 干扰 PCA3 表达可靶向负调控 miR-185 抑制淋巴瘤细胞 L428 增殖, 并促进 L428 细胞凋亡。

目的 考察佛手苷内酯 ( bergapten, BG) 是否通过下调 miR-503 表达抑制高糖 ( high glucose, HG) 诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达和细胞凋亡。 方法 将肾小管上皮细胞分为正常对照 (Con) 组、 高糖 (HG) 组、 高糖 + BG 低、 中、 高浓度 (HG + BG-L、 -M、 -H) 组、 HG + inhibitor-NC 组、 HG + miR-503 inhibitor 组、 HG + BG + miR-NC 组、 HG + BG + miR-503 组。 利用酶联免疫吸附测定法 (ELISA) 测 定炎性因子肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、 白细胞介素-6 (IL-6) 表达, 流式细胞术测定细胞凋亡, Western 印 迹测定凋亡蛋白裂解天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 ( cleaved-caspase) 3、 cleaved-caspase 9 表达, qRTPCR 测定 miR-503 表达。 结果 HG 组肾小管上皮细胞的 TNF-α、 IL-6 表达、 凋亡率、 cleaved-caspase 3、 cleaved-caspase 9 蛋白、 miR-503 表达量均比 Con 组增加 (P均< 0. 05)。 HG + BG-L 组、 HG + BG-M 组、 HG + BG-H 组肾小管上皮细胞的 TNF-α、 IL-6 表达、 凋亡率、 cleaved-caspase 3、 cleaved-caspase 9 蛋白、 miR-503 表达量均比 HG 组减少 (P均< 0. 05), 且 BG 的抑制作用呈现浓度依赖性。 干扰 miR-503 表达后, HG + miR-503 inhibitor 组肾小管上皮细胞的 miR-503 表达量、 TNF-α、 IL-6 表达、 凋亡率、 cleaved-caspase 3 蛋白、 cleaved-caspase 9 蛋白均比 HG + inhibitor-NC 组降低 (P均 < 0. 05)。 HG + BG + miR-503 组肾小管上皮细胞的 miR-503 表达量、 TNF-α、 IL-6 表达、 凋亡率、 cleaved-caspase 3 蛋白、 cleaved-caspase 9 蛋白表达量均高于 HG + BG + miR-NC 组 (P均 < 0. 05)。 结论 BG 通过下调 miR-503 的表达, 以浓度依赖方式抑制高糖诱导的 肾小管上皮细胞炎性因子表达和细胞凋亡。

目的 探讨木犀草素对脂多糖 (LPS) 诱导的肠上皮细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体 家族吡啉结构域蛋白 3 (NLRP3) / 半胱氨酸蛋白酶 1 (caspase-1) 通路的影响。 方法 体外培养人肠上皮 细胞 HIEC-6, 对其进行 (1. 0 μg / mL) LPS 诱导, 并将细胞分为对照组、 LPS 组、 LPS + (25、 50、 100 μmol / L) 木犀草素组、 木犀草素 + NLRP3 激活剂尼日利亚菌素钠盐 (NSS) 组, 除对照组外均添加 1. 0 μg / mL 的 LPS。 MTT 法检测各组细胞活力; 电阻仪检测单层上皮跨膜电阻 ( TEER); 酶联免疫吸附 (ELISA) 法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶 (LDH)、 肿瘤坏死因子 α (TNF-α)、 白介素-6 ( IL-6) 水平; 蛋白免疫印迹 (WB) 法检测各组细胞焦亡相关蛋白 (GSDMD、 GSDMD-N) 及 NLRP3、 caspase-1、 IL-1β 的表达。 结果 与对照组比较, LPS 组 HIEC-6 细胞活力、 TEER 值显著降低, 细胞上清液 LDH 水平、 TNF-α、 IL-6、 蛋白 GSDMD、 GSDMD-N、 NLRP3、 caspase-1、 IL-1β 表达显著升高 (P< 0. 05); 与 LPS 组比较, LPS + (25、 50、 100 μmol / L) 木犀草素组 HIEC-6 细胞活力、 TEER 值显著升高, 细胞上清液 LDH 水平、 TNF-α、 IL-6、 GSDMD、 GSDMD-N、 NLRP3、 caspase-1、 IL-1β 表达显著降低 ( P < 0. 05 ); 与 LPS + 100 μmol / L 木犀草素组比较, 木犀草素 + NSS 组 HIEC 细胞活力、 TEER 值显著降低, 细胞上清液 LDH 水平、 TNF-α、 IL-6、 GSDMD、 GSDMD-N、 NLRP3、 caspase-1、 IL-1β 表达显著升高 (P< 0. 05)。 结论 木犀草素 能够减轻 LPS 诱导的人肠上皮细胞 HIEC-6 焦亡和细胞炎性损伤, 可能与 NLRP3 / caspase-1 信号通路的抑制 有关。

目的 探讨肉桂醛对变应性鼻炎 (allergic rhinitis, AR) 大鼠鼻粘膜细胞凋亡的影响及机制。 方 法 构建大鼠 AR 模型, 并随机分为 AR 组、 肉桂醛低、 中、 高剂量组和氯雷他定组, 另选 10 只大鼠为假 手术组 (sham 组)。 检测大鼠血清 IL-6 水平、 鼻粘膜组织细胞凋亡和 IL-6、 JAK2、 STAT3 mRNA 表达以及 JAK2、 p-JAK2、 STAT3、 p-STAT3、 Bcl-2 及 Bax 蛋白表达。 结果 与 sham 组比, AR 组大鼠血清 IL-6 水平、 鼻粘膜组织 IL-6 mRNA 及 p-JAK2 / JAK2、 p-STAT3 / STAT3 和 Bcl-2 蛋白表达均升高 (P< 0. 05), 细胞凋亡 指数 (AI) 和 Bax 蛋白表达降低 (P< 0. 05); 与 AR 组比, 肉桂醛低、 中、 高剂量组和氯雷他定组大鼠血 清 IL-6 水平、 鼻粘膜组织 IL-6 mRNA 及 p-JAK2 / JAK2、 p-STAT3 / STAT3 和 Bcl-2 蛋白表达均降低 ( P < 0. 05), AI 和 Bax 蛋白表达升高 (P< 0. 05)。 结论 肉桂醛可促进 AR 大鼠鼻粘膜细胞凋亡, 其机制可能与 抑制 IL-6 / JAK2 / STAT3 通路有关。

目的 探究鼠李黄素 (Rhamnetin) 保护糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑损伤的可能机制。 方法 构 建糖尿病大鼠模型, 以线栓法建立脑缺血再灌注, 予以 50、 100 及 200 mg / kg Rhamnetin 灌胃, 给药 14 d 后 检测脑组织含水率、 脑指数、 细胞凋亡、 血清炎性因子、 凋亡及炎性反应标志物、 Notch1 及 P38 丝裂原活 化蛋白激酶 (P38 MAPK) 蛋白表达。 并添加 Notch1 激活剂 Jagged1, 观测各组 Notch1、 P38 MAPK 蛋白表 达。 结果 Rhamnetin 中、 高剂量干预后, 大鼠跳台错误次数、 脑指数、 脑组织含水率、 细胞凋亡率、 IL-6、 IL-1β、 TNF-α、 cleaved caspase-3 / caspase-3、 cleaved caspase-9 / caspase-9、 p-Notch1 / Notch1 及 p-P38 MAPK/ P38 MAPK 减少, 进入新异臂次数和 IL-10 增加 (P< 0. 05); 且 Rhamnetin 可抑制 Jagged1 对 Notch1- P38 MAPK 信号轴的激活 (P< 0. 05)。 结论 鼠李黄素可保护糖尿病脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤, 可能 与下调 Notch1-P38 MAPK 信号轴, 减轻炎性反应有关。

目的 探讨蜘蛛香总黄酮 (total flavonoids from Valeriana jatamansi Jones, TFV) 对胃癌 AGS 细胞 增殖、 迁移及侵袭的影响及其可能的作用机制。 方法 体外培养人胃癌细胞 AGS, 随机分为 Con 组、 TFV-L 组、 TFV-M 组、 TFV-H 组、 miR-NC 组、 miR-4429 组、 TFV + anti-miR-NC 组、 TFV + anti-miR-4429 组。 qRT-PCR, CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 划痕实验和 Transwell 实验分别检测 miR-4429 表达, 细胞增殖、 克隆形成能力、 细胞迁移和侵袭情况; Western 免疫印迹检测 E-cadherin、 N-cadherin 蛋白表达量。 结果 与 Con 组比较, TFV-L 组、 TFV-M 组、 TFV-H 组细胞 E-cadherin 蛋白水平、 增殖抑制率和 miR-4429 的表达 量升高 (P< 0. 05), N-cadherin 蛋白水平和划痕愈合率降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减 少 (P< 0. 05), 且呈剂量依赖性; 与 miR-NC 组比较, miR-4429 组细胞增殖抑制率和 E-cadherin 蛋白水平升 高 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平降低 (P < 0. 05); 与 TFV + anti-miR-NC 组比较, TFV + anti-miR-4429 组细胞增殖抑制率和 E-cadherin 蛋白水平降低 (P<0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多 (P<0. 05), 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05)。 结论 蜘蛛香总黄酮可抑制胃癌 AGS 细胞增殖、 迁移及侵袭, 其抗肿瘤机制与上调 miR-4429 表达有关。

Piezo2 作为 Piezo 通道家族的一员, 是一种表达于背根神经节的感觉神经元亚群的能快速适应、 机械激活的阳离子通道, 它能够将机械性刺激转化为机械敏感性电流, 以控制体表本体觉、 触觉和痛觉的 产生。 如今越来越多的研究表明 Piezo2 在多种痛觉的产生与传导方面有着重要作用。 文章总结整理了机械 敏感离子通道 Piezo2 的结构、 功能及其参与疼痛相关性疾病的发生过程, 以展望其作为可能的干预靶点在 疼痛的治疗思路中的应用。

多发性骨髓瘤 (multiple myeloma, MM) 作为血液系统第二大常见的恶性肿瘤, 尽管在近几十年 其疗效取得了重大提升, 然而目前仍无法治愈。 研究发现这与免疫微环境中细胞与非细胞成分, 如间充质 基质细胞介导免疫逃逸, 破骨细胞活性增高, 成骨细胞分化受损及免疫细胞、 细胞因子的免疫功能异常促 进骨髓瘤细胞的增殖、 存活和耐药密切相关, 与此同时还伴随许多新型治疗工具的产生。 因此, 深入探究 上述成分与骨髓瘤细胞相互作用, 有望为 MM 的临床治疗提供新思路和策略。