目的 探究ClC-7在板层小体(lamellar body,LB)生物发生过程中的作用以及ClC-7突变体的可能致病机制。方法 使用siRNA降低A549细胞内ClC-7的表达,利用激光共聚焦显微镜以及透射电子显微镜来观察LB的形态变化。构建ClC-7野生型以及突变体质粒,观察ClC-7与LB以及其他细胞器的共定位情况。结果 ClC-7定位于LB以及溶酶体上。敲降ClC-7后的A549细胞LB体积增大。p.G203D、p.G215R、p.G292E、p.R403Q、p.L766P突变后的ClC-7主要定位到内质网,但p.P470L突变后ClC-7可以部分转运至LB。结论 A549细胞中ClC-7定位于LB与溶酶体。敲降ClC-7后LB的体积显著增大,结构异常。突变后的ClC-7多数不能正确定位在LB以及溶酶体上。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)GAS5通过靶向miR-155调节Th17/Treg失衡在乳糜泻中的作用。方法 收集20例乳糜泻患者(乳糜泻组)及同时期20例无乳糜泻或其他自身免疫性疾病的健康体检者(健康组)的外周血,分选两组的CD4⁺T细胞。qRT-PCR法检测乳糜泻患者与对照组CD4⁺T细胞中lncRNA GAS5以及miR-155的表达,流式细胞术分析Th17/Treg比例。Pearson统计分析lncRNA GAS5、miR-155的表达水平与Th17/Treg比例的相关性。体外实验中,将乳糜泻组患者的CD4⁺T细胞分为7组:对照组,pcDNA3.1-NC组,pcDNA3.1-GAS5组,miR-NC组,miR-155-mimics组,pcDNA3.1-GAS5+miR-NC组,pcDNA3.1-GAS5+miR-155-mimics组。qRT-PCR法检测各组细胞中lncRNA GAS5和miR-155的表达。Edu染色和Hoest33342染色法分别检测各组CD4⁺T细胞的增殖和凋亡。细胞免疫荧光染色检测各组CD4⁺T细胞中IL-17和Foxp3的表达。流式细胞术检测CD4⁺T细胞中IL-17⁺细胞和Foxp3⁺细胞的比例。结果 与健康组相比,乳糜泻组lncRNA GAS5的表达水平降低,miR-155的表达水平增加。lncRNA GAS5表达与Th17/Treg比例呈负相关性(r=-0.65,P<0.05),miR-155表达与Th17/Treg比例呈正相关性(r=0.70,P<0.05)。乳糜泻组CD4⁺T细胞中,与pcDNA3.1-NC组相比,pcDNA3.1-GAS5组中lncRNA GAS5和Foxp3的表达水平、CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均增加(P_均＜0.05),而miR-155和IL-17的表达水平、CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均降低(P_均＜0.05);与miR-NC组相比,miR-155-mimics组中Foxp3的表达水平、CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均降低(P_均＜0.05),而miR-155和IL-17的表达水平、CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均增加(P_均＜0.05);与pcDNA3.1-GAS5+miR-NC组比,pcDNA3.1-GAS5+miR-155-mimics组中Foxp3的表达水平、CD4⁺T细胞的增殖率和Foxp3⁺细胞比例均降低(P_均＜0.05),而miR-155和IL-17的表达水平、CD4⁺T细胞的凋亡率及IL-17⁺细胞比例均增加(P_均＜0.05)。结论 lncRNA GAS5通过靶向miR-155调节Th17/Treg失衡,影响乳糜泻患者CD4⁺T细胞的增殖和凋亡,进而影响IL-17和Foxp3的表达,提示lncRNA GAS5可能是乳糜泻治疗的潜在靶点。

目的 探讨骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨下骨细胞通过激活非经典Wnt信号通路抑制硬化蛋白(sclerostin)促进骨小梁硬化的机制。方法 建立软骨细胞-成骨细胞共培养体系,细胞实验分组:Control组、OE-vector组、LIF OE组、shRNA-NC组、shRNA-LIF组;通过RNA免疫共沉淀(RIP)检测LIFR与Sclerostin编码基因SOST mRNA的直接相互作用;qRT-PCR检测SOST mRNA的表达水平;软骨细胞过表达/敲低LIF,蛋白质印迹检测软骨细胞中LIF和LIFR及成骨细胞中Sclerostin的表达。40只7~8周龄雄性C57BL 6J小鼠随机分为诱导4周和8周的对照组、假手术组、模型组,及诱导8周的模型+LIFR拮抗剂处理组;Micro-CT检测小鼠关节骨体积分数(BV/TV)、小梁骨厚度(Tb.Th)和小梁骨数量(Tb.N);HE染色和番红O-固绿染色观察小鼠关节组织并进行组织病理学分析;蛋白质印迹检测Wnt 5a、Smad 2/3、Sclerostin、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)/LIF受体(LIF receptor,LIFR)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinases 13,MMP-13)蛋白的相对表达水平。结果 RIP实验结果显示LIFR与SOST mRNA有直接相互作用。LIF过表达后LIFR表达水平升高(P<0.05),Sclerostin表达水平降低(P<0.05);LIF敲低后以上结果相反。模型诱导8周后,模型组小鼠后肢骨关节部位相比于假手术组BV/TV和Tb.Th升高(P<0.05),Tb.N降低(P>0.05);模型+LIFR拮抗剂处理组小鼠后肢骨关节部位相比于模型组BV/TV和Tb.Th降低(P<0.05),Tb.N升高(P>0.05)。HE染色和番红O-固绿染色结果显示,模型组软骨被破坏,细胞间基质降解,细胞排列紊乱,软骨层解体,软骨下骨受累;模型+LIFR拮抗剂处理组软骨表面区和增殖区被破坏,但软骨肥大带相对完整,提示LIFR拮抗剂处理后软骨区域破坏相对缓解。4周或8周后,模型组Wnt 5a、p-Smad 2/3表达水平相比于假手术组升高(P<0.05),Sclerostin表达水平降低(P<0.05),LIF、LIFR、TRAP、MMP-13表达水平升高(P<0.05)。结论 软骨下骨细胞可能通过激活Wnt 5a/Smad 2/3上调LIF抑制Sclerostin,促进骨小梁硬化。

目的 探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)对神经母细胞瘤(NB)DNA损伤和化疗敏感性的调控作用及机制。方法 通过TARGET数据库分析范可尼贫血互补组A型(fanconi anemia complementary group A protein,FACNA)蛋白与NB临床病理特征的关系。构建miR-214-5p低表达、FANCA过/低表达NB细胞系,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、移植瘤模型检测其表达对NB体内外增殖的影响,并验证miR-214-5p与FANCA靶向关系。结果 GEO数据库和TARGET数据库中筛查出与NB相关的交集基因为FANCA,其表达与调节细胞增殖基因、预后及临床病理特征密切相关(P<0.05)。与空载体(Vector)组比较,FANCA组细胞活力、移植瘤体积和重量升高(P<0.05);与shNC组比较,shFANCA1组、shFANCA2组细胞活力降低(P<0.05);与对照组比较,1 mmol/L过氧化氢(H₂O₂)处理后磷酸化组蛋白γ-H2AX升高(P<0.05),但FANCA过表达后γ-H2AX降低(P<0.05)。随着多柔比星浓度增加,细胞活力降低,但FANCA组细胞活力高于Vector组(P<0.05)。miR-214-5p与FANCA存在靶向关系。结论 miR-214-5p可靶向降低FANCA表达抑制NB细胞增殖,参与细胞DNA损伤和化疗敏感性调控。

目的 探讨丁酸钠(sodium butyrate)改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)模型小鼠胰岛素敏感性的免疫学机制。方法 饲喂小鼠高脂高糖饮食联合链脲佐菌素诱导建立T2DM小鼠模型。30只雄性C57BL/6小鼠分为3组:对照组,模型组,模型+丁酸钠组,每组10只。测定小鼠葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验。流式细胞术测定外周血和脂肪组织中浸润的调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)和辅助T细胞17(T helper type 17,Th17)比率(%)。蛋白质印迹法测定脂肪组织浸润的Treg和Th17细胞中p-mTOR、mTOR、p-p70S6K和p70S6K的相对表达水平。结果 葡萄糖耐量试验结果显示与对照组相比,模型+丁酸钠组在20 min时血糖升高(P<0.05),在后续时间点时血糖无统计学显著性差异(P>0.05)。胰岛素耐量试验结果显示模型+丁酸钠组在所有时间点血糖改变无统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组外周血Th17细胞占比(%)和脂肪组织中浸润的Th17细胞占比(%)升高(P<0.05);外周血Treg细胞占比(%)和脂肪组织中浸润的Treg细胞占比(%)降低(P<0.05);脂肪组织中浸润的Treg细胞和Th17细胞中p-mTOR和p-p70S6K表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,模型+丁酸钠组显著逆转了上述指标值(P<0.05)。结论 丁酸钠治疗可抑制mTOR/p70S6K信号通路的活化水平,调节外周血和脂肪组织中Treg和Th17细胞数量,改善2型糖尿病小鼠模型胰岛素敏感性。

目的 探究氧化槐果碱通过调节核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)/醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]通路对乳腺癌(breast cancer,BC)细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响。方法 使用MDA-MB-231和MCF-7细胞系。通过CCK-8检测细胞活性;定量实时聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印迹检测增殖(Survivin,Ki67,P21)、凋亡(cleaved caspase-3/9,Bax/Bcl-2)及Nrf2/HO-1/NQO1通路相关分子表达;流式细胞术分析凋亡及线粒体膜电位;酶联免疫吸附检测(ELISA)测定氧化应激指标超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)。在MDA-MB-231细胞中过表达Nrf2验证通路作用。建立裸鼠移植瘤模型评估肿瘤生长、Ki67表达、caspase-3阳性率、凋亡率(TUNEL)及Nrf2/HO-1/NQO1通路蛋白质表达。结果 氧化槐果碱剂量依赖性抑制BC细胞活性,诱导凋亡,降低线粒体膜电位。其显著抑制增殖相关分子(Survivin,Ki67)表达,促进凋亡相关分子(P21,cleaved caspase-3/9,Bax/Bcl-2比值)表达;同时抑制Nrf2/HO-1/NQO1通路活化,加剧氧化应激(降低SOD、GSH,升高MDA)。过表达Nrf2可部分逆转氧化槐果碱的上述效应。动物实验证实氧化槐果碱抑制肿瘤生长、降低增殖(Ki67)、促进凋亡(caspase-3,TUNEL)并抑制体内Nrf2通路活化。结论 氧化槐果碱通过抑制Nrf2/HO-1/NQO1信号通路,有效抑制乳腺癌细胞增殖、诱导凋亡并增强氧化应激。

目的 研究环状RNA囊泡相关膜蛋白相关蛋白A(vesicle-associated membrane protein-associated protein A,circVAPA)靶向miR-377-3p调控锌指E盒结合同源框2(Zinc-finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)在乳腺癌紫杉醇耐药中的作用。方法 培养人乳腺癌细胞株MCF7及其紫杉醇耐药株MCF7/Taxol,检测其中circVAPA、miR-377-3p、ZEB2的表达。MCF7/Taxol细胞分为对照组、阴性对照(NC)组、si-circVAPA组、miR-377-3p模拟物组、miR-377-3p抑制物组、si-circVAPA+miR-377-3p抑制物组、对照质粒组、circVAPA组、circVAPA+miR-377-3p组。采用双荧光素酶报告基因实验检测circVAPA靶向miR-377-3p、miR-377-3p靶向ZEB2的情况,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率并评估紫杉醇敏感性。结果 MCF7/Taxol细胞中circVAPA、ZEB2的表达水平高于MCF7细胞,miR-377-3p的表达水平低于MCF7细胞(P<0.05)。miR-377-3p模拟物组MCF7/Taxol细胞中circVAPA和ZEB2野生型报告基因的活性均低于NC组(P<0.05),circVAPA和ZEB2突变型报告基因的活性与NC组比较无显著差异(P>0.05)。si-circVAPA组和miR-377-3p模拟物组MCF7/Taxol细胞的紫杉醇敏感性高于NC组(P<0.05),ZEB2的表达水平低于NC组(P<0.05)。circVAPA组的紫杉醇敏感性低于对照质粒组,ZEB2的表达水平高于对照质粒组;circVAPA+miR-377-3p组的紫杉醇敏感性高于circVAPA组,ZEB2的表达水平低于circVAPA组(P<0.05)。si-circVAPA+miR-377-3p抑制物组MCF7/Taxol细胞的紫杉醇敏感性低于si-circVAPA组(P<0.05),ZEB2的表达水平高于si-circVAPA组(P<0.05)。结论 circVAPA靶向miR-377-3p调控ZEB2与乳腺癌细胞紫杉醇耐药相关。

目的 应用生物信息学探索迁移体相关基因在前列腺癌中表达模式,并阐明其潜在机制。方法 从TCGA数据库中获取498例前列腺癌转录组数据。使用“limma”包识别前列腺癌组织中差异表达基因,并且在GSE70770和GSE88808数据集中进行验证。通过蛋白注释数据库筛选迁移体相关差异表达基因(migrasome-related differentially expressed genes,MRDEGs)。应用基因本体论(GO)研究MRDEGs功能富集。使用LASSO回归和SVM-RFE模型筛选诊断前列腺癌关键MRDEGs,构建预测前列腺癌风险的列线图。分析22种浸润性免疫细胞与MRDEGs之间相关性。结果 在前列腺癌组织中鉴定出6个MRDEGs。GSE70770和GSE88808中验证PKD1、ITGB1及ITGA5在前列腺癌组织中稳定低表达。GO分析显示MRDEGs主要富集于细胞周期蛋白依赖性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性调节、钙通道活性及跨膜转运蛋白结合等分子功能。机器学习筛选出ITGB1和ITGA5作为诊断前列腺癌的关键MRDEGs。其构建的预测前列腺癌列线图在训练集TCGA数据库中AUC值为0.833,在外部验证集GSE70770中AUC值为0.868。发现静息状态树突细胞、中性粒细胞与ITGB1和ITGA5的表达水平呈正相关;而调节性T细胞(Tregs)、M0型巨噬细胞则与ITGB1和ITGA5的表达水平呈负相关。结论 我们的研究采用生物信息学方法系统地阐明了迁移体相关基因ITGB1和ITGA5在前列腺癌发病机制发挥重要作用,可能为治疗前列腺癌的分子靶点提供新的见解。

目的 探究肾癌细胞外泌体调控CD8⁺T细胞肿瘤杀伤功能。方法 将HK-2 exo、786-O exo、SN12-PM6 exo(10 μg/mL)以及等体积的磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution,PBS)与CD8⁺T细胞共孵育,细胞毒性实验检测杀伤功能,酶联免疫吸附检测(ELISA)测定干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白介素-2(interleukin 2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)浓度,蛋白质印迹检测CD8⁺T细胞程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)表达。CD8⁺T转染PD-1 siRNA(si-PD-1)以及siRNA Negative Control(si-NC)后分别与786-O exo和SN12-PM6 exo共孵育24 h后检测CD8⁺T细胞对786-O和SN12-PM6细胞杀伤功能。结果 相比于PBS组,786-O exo组、SN12-PM6 exo组CD8⁺T细胞分泌IFN-γ、IL-2以及TNF-α浓度显著降低(P＜0.05),杀伤786-O和SN12-PM6能力显著降低(P＜0.05),PD-1蛋白表达显著上调(P＜0.05)。而转染si-PD-1的CD8⁺T细胞与786-O exo和SN12-PM6 exo共孵育后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度以及杀伤786-O和SN12-PM6的能力均显著高于转染si-NC且与786-O exo和SN12-PM6 exo共孵育后的CD8⁺T细胞(P_均＜0.05)。结论 肾癌细胞外泌体诱导CD8⁺T细胞PD-1表达而抑制肿瘤杀伤功能。

目的 探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MIR100HG对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化的影响。方法 在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞中分别进行MIR100HG的过表达和抑制处理后,采用MTS法检测细胞增殖能力,采用流式细胞术分析细胞凋亡率,采用Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹分析MIR100HG对上皮-间质转化相关标志物的调控作用。结果 MIR100HG过表达能够促进MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,减少细胞凋亡,并能下调上皮标志物和上调间质标志物的表达;抑制MIR100HG后以上结果相反。结论 lncRNA MIR100HG过表达能够促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭,减少MDA-MB-231细胞凋亡,诱导MDA-MB-231细胞的上皮-间质转化过程。

目的 研究血清防御素5(defensin 5)水平对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者合并胰周坏死感染的关系。方法 选择2020年5月~2023年12月昆山市中医医院收治的224例SAP患者进行回顾性研究,根据是否发生胰周坏死感染分为坏死感染组(n=96)和非坏死感染组(n=128),比较两组间一般资料及入院后24 h内血清防御素5水平、实验室指标的差异,采用logistic回归分析SAP合并胰周坏死感染的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析胰周坏死感染的诊断指标。结果 坏死感染组的血清防御素5和血钙水平低于非坏死感染组,发病至入院时间、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平及降钙素原(procalcitonin,PCT)水平高于非坏死感染组,差异有统计学意义(P<0.05);经logistic回归分析显示,血清防御素5水平、发病至入院时间、血钙水平、CRP和PCT水平是发生胰周坏死感染的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,血清防御素5水平、发病至入院时间、血钙水平、CRP和PCT水平单独及联合均对SAP合并胰周坏死感染具有诊断价值,联合诊断的灵敏度82.81 %、特异度96.99 %。结论 血清防御素5水平降低与SAP合并胰周坏死感染相关,防御素5水平联合发病至入院时间、血钙水平、CRP和PCT水平对SAP合并胰周坏死感染具有较好的诊断效能。

目的 探讨免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交技术在乳腺癌人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)检测中的问题。方法 对西安交通大学第一附属医院病理科309例HER2 IHC 2+乳腺癌病例进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,包含2018年院内送检的159例乳腺癌标本与2016~2019年外院送检的96例标本及2010年至2012年院内送检的54例HER2 IHC 2+的乳腺癌进行FISH检测。结果 院内2018年送检乳腺癌HER2 IHC 2+病例FISH检测结果阳性率明显低于外院送检和院内送检的2010年至2012年病例。结论 临床考虑需要进行HER2治疗的乳腺癌患者,对于下级医院送检的HER2阳性的病例都应进一步进行免疫组织化学检测或FISH检测,对于一些早期诊断为HER2阴性的病例均应进行复查,以精确指导治疗。

视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid inducible gene protein Ⅰ,RIG-Ⅰ)作为胞质模式识别受体,能够识别RNA病毒并通过构象变化来激活线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS),触发TBK1-IRF3/IKK-NF-κB通路诱导Ⅰ型干扰素(type Ⅰ interferons,IFN-Ⅰ)产生。RIG-Ⅰ编码基因DDX58的突变或RIG-Ⅰ的过度激活会致使IFN-Ⅰ等炎症因子过量表达,促进细胞凋亡和自身抗体形成,造成心、脑、肾等多脏器的损伤。RIG-Ⅰ近几年在感染性疾病和非感染性疾病中的“跨界”作用受到广泛关注,文章综述了RIG-Ⅰ及其在系统性红斑狼疮、肿瘤、心血管等疾病中的作用。

肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一种致命的神经系统变性疾病,选择性运动神经元死亡是其显著病理特点。诱发ALS神经元死亡的机制错综复杂,目前尚无有效的治疗方案,深入探索潜在疾病机制,寻找可能延缓疾病进展、延长生存期并最终减轻疾病负担的神经保护剂迫在眉睫。铁死亡(ferroptosis)是一种由铁离子介导的程序性细胞死亡模式,其通过脂质过氧化和氧化应激导致神经元损伤。近年研究揭示,铁死亡与ALS的病理机制密切相关,可能成为潜在治疗靶点。文章综述了铁死亡的分子机制、ALS的病理特征及两者之间的潜在联系,探讨了靶向铁死亡治疗ALS的临床试验最新进展,以期开辟ALS治疗新途径。

随着人工智能技术的迅速发展,其为精准护理人才的培养提供了新路径。文章对精准护理人才培养的目标、人工智能在精准护理教育中的应用优势及应用现状进行综述,分析其面临的挑战,提出发展建议,旨在为人工智能在精准护理人才培养中的应用提供参考。