lncHAGLR 通过抑制 miR-26a 激活 NF-κB 促进骨关节炎大鼠软骨细胞的炎症反应和细胞凋亡 #br#
孟晓源, 乌尔坎· 叶尔肯, 王志刚, 马乐
医学分子生物学杂志. 2024, 21(2):
115-123.
doi:10.3870/j.issn.1672-8009.2024.02.004
摘要
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多维度评价
目的 探讨长链非编码 RNA ( long non-coding RNA, lncRNA) HOXD 反义生长相关长链非编码RNA (HOXD antisense growth-associated long non-coding RNA, lncHAGLR) 对大鼠膝关节退行性软骨细胞C518 细胞的炎症反应和凋亡的作用与潜在机制。 方法 采用 StarBase 和荧光素酶报告基因法预测和确认 lncHAGLR 和微小 RNA (microRNA, miR) -26a 之间的相互作用。 为研究 lncHAGLR 对 miR-26a 表达的调控作用, 将 C518 细胞分为沉默 lncHAGLR 的小干扰 RNA ( small interfering RNA, siRNA) 载体质粒 ( si-lncHAGLR) 组、 siRNA 的阴性对照 (negative control of siRNA, si-NC) 组、 miR-26a 抑制剂阴性对照 ( negative control of miR-26a inhibitor, inhibitor-NC) 组、 miR-26a 的抑制剂 (miR-26a-inhibitor) 组。 此外, 为研究lncHAGLR 是否通过调控 miR-26a 对 C518 细胞的炎症和凋亡具有调控作用, 将 C518 细胞分为 5 组: Control组、 白细胞介素 ( interleukin, IL) -1β 组、 IL-1β + si-NC 组、 IL-1β + si-lncHAGLR 组和 IL-1β + si-lncHAGLR + miR-26a-inhibitor 组。 采用实时定量 PCR ( real-time quantitative PCR, qRT-PCR) 分析 lncHAGLR 和miR-26a 的水平。 采用四甲基偶氮唑蓝 ( methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)、 乳酸脱氢酶 ( lactate dehydrogenase, LDH) 和流式细胞术 (flow cytometry, FCM) 检测 C518 细胞的增殖、 细胞毒性和凋亡情况。 蛋白质印迹检测切割模式的半胱天冬酶 3 (CLEAVED-CASPASE3)、 核因子 κB P65 ( nuclear factor-κB P65, NF- κB P65)、 磷酸化的 NF-κB P65 (phosphorylated NF-κB P65, P-NF-κB P65) 的表达。 ELISA 法检测白细胞介素 (interleukin, IL) -6 和肿瘤坏死因子 (tumor necrosis factor, TNF) -α 的释放。 结果 lncHAGLR 直接靶向 miR-26a。 在 IL-1β 组, lncHAGLR 水平明显较 Control 组增高, miR-26a 水平较 Control 组降低 ( P均 < 0. 05)。 此外, IL-1β + si-lncHAGLR 组减轻了 IL-1β 诱导的 C518 细胞的炎症并抑制了凋亡, 而且细胞的活力增加, LDH 释放减少, CLEAVED-CASPASE3 的表达被抑制, TNF-α 和 IL-6 的分泌减少, 且 p-NF-κB P65表达减少 (P均 < 0. 05)。 IL-1β + si-lncHAGLR + miR-26a-inhibitor 组逆转了 IL-1β + si-lncHAGLR 组的结果(P均 < 0. 05)。 结论 lncHAGLR 通过抑制 miR-26a 激活 NF-κB 促进 C518 细胞的炎症反应和细胞凋亡, 表明 lncHAGLR 可能是治疗骨关节炎的一个有价值的靶点。
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