医学分子生物学杂志 ›› 2023, Vol. 20 ›› Issue (4): 324-331.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2023.04.008
摘要: 目的 探讨长链非编码 RNA 膀胱癌相关转录本 1 (LncRNA BLACAT1) 调节 miR-324-5p / 丝裂原 活化蛋白激酶激酶激酶激酶 3 (MAP4K3) 轴对人肝癌细胞增殖、 迁移和侵袭的影响。 方法 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 检测肝癌组织、 癌旁组织以及人正常肝细胞、 人肝癌细胞 ( Huh-7、 SMMC-7721、 MHCC97 L) 中 BLACAT1、 miR-324-5p、 MAP4K3 mRNA 的表达水平; 将肝癌细胞系 Huh-7 细胞分为: ctrl 组、 si-NC 组、 si-BLACAT1 组、 si-BLACAT1 + miR-NC 组、 si-BLACAT1 + miR-324-5p inhibitor 组; 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 检测各组细胞中 BLACAT1、 miR-324-5p、 MAP4K3 mRNA 的表达; CCK-8 法检测细胞增殖; 划痕实验检测细胞迁移; Transwell 小室检测细胞侵袭; 蛋白免疫印迹检测细胞中 MAP4K3、 PCNA、 MMP2、 MMP9、 c-Myc、 Cyclin D1 的表达; 双荧光素酶报告基因实验分别验证 BLACAT1 和 miR-324-5p、 miR-324-5p 和 MAP4K3 的关系。 结果 肝癌组织和人肝癌细胞系中 BLACAT1、 MAP4K3 mRNA 表达水平显著增加, miR-324-5p 表达显著降低 (P< 0. 05); 与 ctrl 组、 si-NC 组比较, si-BLACAT1 组 Huh-7 细胞的 BLACAT1、 MAP4K3 mRNA 表达、 A450值、 迁移率、 侵袭率、 PCNA、 MMP2、 MMP9、 MAP4K3、 c-Myc、 Cyclin D1 表达 明显降低 (P< 0. 05), miR-324-5p 表达显著增加 (P< 0. 05); 抑制 miR-324-5p 表达减弱了敲低 BASCAT1 对 Huh-7 细胞的增殖、 迁移和侵袭能力的抑制作用; BASCAT1 靶向负调控 miR-324-5p 表达, miR-324-5p 靶 向调控 MAP4K3 表达。 结论 敲低 BLACAT1 可能通过靶向 miR-324-5p 来下调 MAP4K3 表达, 进而抑制肝 癌细胞增殖、 迁移和侵袭。
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