目的 探讨免疫浸润相关基因 mRNA 在宫颈癌与宫颈癌前病变中的表达水平及其与预后的关系。 方法 选取延安大学附属医院 2017 年 1 月至 2019 年 1 月宫颈癌患者 74 例作为宫颈癌变组, 宫颈癌前病变 患者 74 例作为宫颈癌前病变组, 另选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者 74 例作为宫颈正常组, 比较 3 组免疫浸润相关基因 [人类白细胞抗原 G (HLA-G)、 叉状头螺旋转录因子 3 (FOXP3)、 T 细胞免疫球蛋白 粘连蛋白-3 (TIM-3)]、 恶性生物学行为相关基因 [侵袭基因 p21-活化的激酶6 (PAK-6)、 zeste 2 多梳抑制 复合物 2 亚基增强子 (EZH2)、 增殖基因血管生成素样蛋白 4 (ANGPTL4)、 同源盒基因 B7 (HOXB7)] 的 mRNA 相对表达量, 分析免疫浸润相关基因与宫颈癌发生及宫颈癌恶性生物学行为的关系, 并统计对比不 同免疫浸润相关基因表达水平患者 3 年生存率。 结果 HLA-G、 FOXP3、 TIM-3 mRNA 相对表达量为宫颈癌 变组 > 宫颈癌前病变组 > 宫颈正常组 (P< 0. 05); 不同临床分期、 分化程度, 以及有无淋巴结转移、 有无 脉管浸润患者的 HLA-G、 FOXP3、 TIM-3、 PAK-6、 EZH2、 ANGPTL4、 HOXB7 mRNA 相对表达量差异有统计 学意义 (P< 0. 05); HLA-G、 FOXP3、 TIM-3 的 mRNA 高表达患者宫颈癌前病变进展至宫颈癌的风险分别是 低表达患者的 3. 005 倍、 4. 654 倍、 3. 343 倍; 宫颈癌患者 HLA-G、 FOXP3、 TIM-3 mRNA 与侵袭相关基因 PAK-6、 EZH2 mRNA、 增殖相关基因 ANGPTL4、 HOXB7 的 mRNA 表达呈正相关 (P< 0. 05); 随访 3 年, 失 访 2 例, 72 例宫颈癌患者 3 年生存率为 68. 06 % (49 / 72), HLA-G、 FOXP3、 TIM-3 的 mRNA 高表达患者 3 年生存率均低于低表达患者 (P< 0. 05)。 结论 免疫浸润相关基因 HLA-G、 FOXP3、 TIM-3 的 mRNA 在宫 颈癌与宫颈癌前病变中呈上调表达, 会显著增加宫颈癌发病风险, 且与宫颈癌恶性生物学行为密切相关, 还可能对生存预后产生重要影响。 

目的 探讨异氟醚对高糖诱导的 H9C2 心肌细胞损伤及磷脂酰肌醇 3 激酶 ( phosphatidylinositol 3- kinase, PI3K) / 蛋白激酶 B (protein kinase B, AKT) / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mammalian target of rapamycin, mTOR) 信号通路的影响。 方法 选取对数生长期的 H9C2 心肌细胞, 分组为: ① 对照组, 未处理 的 H9C2 心肌细胞; ② 高糖组 (35 mmol / L 葡萄糖); ③ 异氟醚低浓度组 (在高糖组的基础上加入 1 % 异 氟醚); ④ 异氟醚高浓度组 (在高糖组的基础上加入 2 % 异氟醚); ⑤ 异氟醚高浓度 + LY294002 组 (在高 糖组的基础上加入 2 % 异氟醚 + 50 μmol / L LY294002)。 CCK-8 法检测各组细胞增殖; 透射电子显微镜观察 各组细胞自噬情况; 流式细胞术检测各组细胞凋亡; Western 印迹检测各组细胞中 PI3K/ Akt / mTOR 通路及 自噬 (Beclin1)、 凋亡 (Bax) 相关蛋白表达。 结果 与对照组相比, 高糖组细胞中明显可见形成的自噬小体, 增殖率、 p-PI3K/ PI3K、 p-Akt/ Akt、 p-mTOR/ mTOR 降低, 细胞凋亡率、 Bax、 Beclin1 蛋白表达显著增加 (P< 0. 05)。 与高糖组相比, 经不同浓度的异氟醚处理后, 细胞增殖率、 p-PI3K/ PI3K、 p-Akt/ Akt、 p-mTOR/ mTOR 显 著增加, 自噬小体减少, 细胞凋亡率、 Bax、 Beclin1 蛋白表达显著下降 (P< 0. 05); 与异氟醚高浓度组相比, 异 氟醚高浓度 + LY294002 组细胞增殖率、 p-PI3K/ PI3K、 p-Akt/ Akt、 p-mTOR/ mTOR 降低, 自噬小体增多, 细胞凋 亡率、 Bax、 Beclin1 蛋白表达显著增加 (P<0. 05)。 结论 异氟醚可以抑制高糖诱导的 H9C2 心肌细胞自噬、 凋 亡, 提高细胞存活率, 减少细胞损伤, 可能与 PI3K/ Akt/ mTOR 通路的激活有关。 

目的 探究干扰长链非编码 RNA LINC01133 在宫颈癌细胞中的作用和机制。 方法 TCGA 数据 库和 qRT-PCR 分析 LINC01133 在宫颈癌组织和细胞中的表达; qRT-PCR 检测 LINC01133-shRNAs 的敲低效 率; SiHa 细胞分为 Control 组、 shRNA-NC 组、 LINC01133-shRNA1 组, 克隆形成实验检测细胞增殖, ELISA 检测肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、 白细胞介素 ( IL) -6 和 IL-1β 水平; 免疫荧光检测 SiHa 细胞中 P65 的核 转移; Western 印迹检测 P65 的磷酸化; 试剂盒检测超氧化物歧化酶 (SOD) 和乳酸脱氢酶 (LDH); 建立 裸鼠移植瘤模型, 分析干扰 LINC01133 表达对肿瘤生长的影响。 结果 LINC01133 在宫颈癌组织和细胞中 的表达显著上调 (P< 0. 05)。 LINC01133-shRNA1 组敲除效率最为显著, 选择此组作为后续实验干扰组; 与 对照组相比, LINC01133-shRNA1 组克隆形成率、 炎性因子水平、 P65 磷酸化水平、 细胞核 P65 含量和 LDH 水平均显著升高 (P< 0. 05), SOD 活性显著降低 (P< 0. 05); 在裸鼠成瘤实验中, 与 shRNA-NC 组相比, LINC01133-shRNA1 组肿瘤组织体积、 重量、 SOD 活性均显著降低 (P< 0. 05), P65 的磷酸化水平显著升高 (P< 0. 05)。 结论 干扰 LINC01133 抑制宫颈癌细胞生长、 炎性因子水平和氧化应激。

目的 初步探讨干扰成纤维生长因子 18 (fibroblast growth factor-18, FGF-18) 在结肠癌中的抗肿 瘤作用。 方法 体外培养结肠癌细胞株 SW480, 分为 Control 组、 shRNA-NC 组和 sh-FGF-18 组; 克隆实验 检测细胞增殖能力; 流式细胞仪检测细胞凋亡情况; Hoechst 观察凋亡后细胞形态变化; 划痕实验检测细胞 迁移能力; Transwell 检测细胞侵袭能力; HE 染色观察小鼠肝和肺组织转移情况; Western 印迹检测上皮间 质转化 (epithelial-mesenchymal transition, EMT) 相关标记物 E-钙粘蛋白 (E cadherin, E-cad), N-钙粘蛋 白 (N-cadherin, N-cad), 纤维连接蛋白 (fibronectin, FN) 水平; 裸鼠成瘤实验检测肿瘤体积及大小; 免 疫组化检测小鼠肿瘤组织 E-cad、 N-cad、 FN 在结肠癌组织中的阳性表达。 结果 与 shRNA-NC 组比较, FGF-18-shRNA 组细胞 FGF-18 mRNA 和蛋白水平相对表达水平降低, 克隆细胞和侵袭细胞减少, 划痕距离 增加, 凋亡细胞增多, E-cad 蛋白水平增加, N-cad 和 FN 蛋白水平减少; E-cad 在 sh-FGF-18 组中的阳性表 达高于 shRNA-NC 组, N-cad 和 FN 的表达低于 shRNA-NC 组 (P< 0. 05)。 与 shRNA-NC 组比较, sh-FGF-18 组中原发灶瘤体重量变轻, 体积变小 (P< 0. 05), 肝和肺组织表面转移灶较少 (P< 0. 05)。 结论 干扰 FGF-18 基因表达抑制结肠癌细胞的增殖、 迁移和侵袭, 促进凋亡, 抑制裸鼠移植瘤生长能力, 可能通过抑 制 EMT 途径影响肿瘤转移。 

目的 探究 miR-205 与 JAK2 / STAT3 在三阴性乳腺癌发展中的作用关系, 以期为三阴性乳腺癌的 治疗提供新思路。 方法 使用实时荧光定量 PCR 法和 Western 印迹检测癌组织和癌旁组织中 miR-205 和 JAK2 的表达水平。 用 miR-205 mimic、 miR NC、 pcDNA3. 1 JAK2 和 pcDNA3. 1 NC 转染 MDA-MB-231 细胞 后, Western 印迹实验检测 JAK2 途径蛋白的表达。 划痕实验检测 MDA-MB-231 细胞的迁移情况, Transwell 实验检测细胞的侵袭能力, 集落形成实验分析 MDA-MB-231 细胞的生长能力, 流式细胞术分析 MDA-MB-231 细胞凋亡情况, 荧光素酶报告基因实验分析 miR-205 和 JAK2 的相互作用情况。 结果 在三阴性乳腺癌 组织中, miR-205 表达水平降低, JAK2 的表达水平升高。 通过在 MDA-MB-231 细胞实验中过表达 miR-205 后, 三阴性乳腺癌细胞的生长、 侵袭和转移能力均受到抑制, 同时凋亡率显著增加。 另外, 在 MDA-MB-231 细胞实验中过表达 JAK2 后, 三阴性乳腺癌细胞的生长、 侵袭和转移能力均增加, 同时凋亡率显著降 低。 荧光素酶报告基因实验发现, miR-205 能够靶向抑制 JAK2 活性。 结论 miR-205 能够靶向调控 JAK2 / STAT3 途径, 进而抑制三阴性乳腺癌细胞的生长、 侵袭和转移, 并同时促进三阴性乳腺癌细胞凋亡。 

目的 探讨长链非编码 RNA (long noncoding RNA, LncRNA) HOTAIR 调控乳腺癌细胞紫杉醇耐 药的潜在分子机制。 方法 筛选出乳腺癌紫杉醇抗性细胞系 (MCF7 / TR 细胞), 并且检测 MCF7 / TR 细胞 以及亲代细胞的 HOTAIR 的表达水平以及紫杉醇耐药指标 (增殖水平、 凋亡水平、 细胞周期、 细胞内紫杉 醇浓度)。 结果 敲低 HOTAIR 后, 紫杉醇处理可以显著抑制 MCF7 / TR 细胞的增殖和诱导细胞凋亡, 并且 诱导 MCF7 / TR 细胞停滞于 G1期。 敲低 HOTAIR 后 MCF7 / TR 细胞内紫杉醇浓度升高。 miR-130a-3p 与 HOTAIR 存在相互作用。 过表达 miR-130a-3p 时 MCF7 / TR 细胞内紫杉醇浓度明显升高, 敲低 HOTAIR 后, MCF/ TR 细胞中 miR-130a-3p 的表达水平升高。 miR-130a-3p 靶向 ABCC5 mRNA 的 3′端非翻译区。 过表达 ABCC5 时 MCF7 / TR 细胞内紫杉醇浓度明显升高。 结论 LncRNA HOTAIR 通过 miR-130a-3p / ABCC5 轴减少 了紫杉醇耐药细胞中紫杉醇细胞内水平, 促进了乳腺癌细胞对紫杉醇的耐药。

目的 探讨长链非编码 RNA 膀胱癌相关转录本 1 (LncRNA BLACAT1) 调节 miR-324-5p / 丝裂原 活化蛋白激酶激酶激酶激酶 3 (MAP4K3) 轴对人肝癌细胞增殖、 迁移和侵袭的影响。 方法 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 检测肝癌组织、 癌旁组织以及人正常肝细胞、 人肝癌细胞 ( Huh-7、 SMMC-7721、 MHCC97 L) 中 BLACAT1、 miR-324-5p、 MAP4K3 mRNA 的表达水平; 将肝癌细胞系 Huh-7 细胞分为: ctrl 组、 si-NC 组、 si-BLACAT1 组、 si-BLACAT1 + miR-NC 组、 si-BLACAT1 + miR-324-5p inhibitor 组; 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 检测各组细胞中 BLACAT1、 miR-324-5p、 MAP4K3 mRNA 的表达; CCK-8 法检测细胞增殖; 划痕实验检测细胞迁移; Transwell 小室检测细胞侵袭; 蛋白免疫印迹检测细胞中 MAP4K3、 PCNA、 MMP2、 MMP9、 c-Myc、 Cyclin D1 的表达; 双荧光素酶报告基因实验分别验证 BLACAT1 和 miR-324-5p、 miR-324-5p 和 MAP4K3 的关系。 结果 肝癌组织和人肝癌细胞系中 BLACAT1、 MAP4K3 mRNA 表达水平显著增加, miR-324-5p 表达显著降低 (P< 0. 05); 与 ctrl 组、 si-NC 组比较, si-BLACAT1 组 Huh-7 细胞的 BLACAT1、 MAP4K3 mRNA 表达、 A450值、 迁移率、 侵袭率、 PCNA、 MMP2、 MMP9、 MAP4K3、 c-Myc、 Cyclin D1 表达 明显降低 (P< 0. 05), miR-324-5p 表达显著增加 (P< 0. 05); 抑制 miR-324-5p 表达减弱了敲低 BASCAT1 对 Huh-7 细胞的增殖、 迁移和侵袭能力的抑制作用; BASCAT1 靶向负调控 miR-324-5p 表达, miR-324-5p 靶 向调控 MAP4K3 表达。 结论 敲低 BLACAT1 可能通过靶向 miR-324-5p 来下调 MAP4K3 表达, 进而抑制肝 癌细胞增殖、 迁移和侵袭。

目的 研究 BMP9 对 P38 MAPK 信号通路的调控作用以及对成骨细胞自噬和凋亡的影响。 方法 体外培养小鼠 MC3T3-E1 成骨细胞系, 用雷帕霉素 ( rapamycin) 诱导细胞发生自噬, Western 印迹检测 BMP9、 P38、 p-P38 的蛋白表达。 再将细胞随机分组后进行相应处理, 分别为 pcDNA3. 1-BMP9 组 ( pcDNA3. 1-BMP9)、 BMP9 siRNA 组 (BMP9 siRNA)、 P38 激活组 (茴香霉素, 10 μmol / L)、 P38 抑制组 ( SB202190, 10 μmol / L)、 pcDNA3. 1-BMP9 + P38 抑制组 ( pcDNA3. 1-BMP9 + SB-202190, 10 μmol / L)、 BMP9 siRNA + P38 激活组 (BMP9 siRNA + 茴香霉素, 10 μmol / L) 以及对照组。 Western 印迹检测自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ、 Beclin-1 和 P62 的表达, CCK-8 和流式细胞技术检测细胞的增殖和凋亡情况。 结果 雷帕霉素处理 后的 MC3T3-E1 细胞中 LC3-Ⅱ、 Beclin-1、 BMP9 和 p-P38 蛋白升高 (P< 0. 05), P62 蛋白降低 (P< 0. 05)。 pcDNA3. 1-BMP9 组、 P38 激活组 LC3-Ⅱ和 Beclin-1 蛋白升高 (P< 0. 05), P62 蛋白降低 (P< 0. 05); BMP9 siRNA 组、 P38 抑制组 LC3-Ⅱ和 Beclin-1 蛋白降低 (P< 0. 05), P62 蛋白升高 (P< 0. 05)。 pcDNA3. 1-BMP9 + P38 抑制组和 BMP9 siRNA + P38 激活组 LC3-Ⅱ、 Beclin-1 和 P62 蛋白水平与对照组均无差异 (P均 > 0. 05)。 pcDNA3. 1-BMP9 组细胞增殖率升高、 凋亡率降低 (P均 < 0. 05); BMP9 siRNA 细胞增殖率降低, 凋亡率升 高 (P均 < 0. 05)。 P38 激活组细胞增殖率升高, 凋亡率降低 (P均 < 0. 05); P38 抑制组细胞增殖率降低, 凋 亡率升高 (P均 < 0. 05)。 pcDNA3. 1-BMP9 + P38 抑制组和 BMP9 siRNA + P38 激活组细胞增殖率、 凋亡率与 对照组均无差异 (P均 > 0. 05)。 结论 BMP9 能激活 P38 MAPK 通路, 诱导成骨细胞自噬, 减少细胞凋亡。

目的 探讨复方守宫散 (Compound Shougong powder, CSP) 通过肿瘤坏死因子 α (TNF-α) 信号 通路对骨癌痛大鼠痛觉敏化机制的影响。 方法 通过注射 Lewis 肺癌细胞建立肺癌骨癌痛大鼠模型; 将大 鼠随机分为模型组、 阳性对照 (扶他林, 0. 1 g / kg) 组、 CSP 低 (CSP-L, 20 mg / kg)、 中 (CSP-M, 40 mg / kg)、 高 (CSP-H, 80 mg / kg) 剂量组, 并设置假手术组大鼠, 每组各 10 只。 干预结束后, 检测大鼠机械 性缩足反射阈值 (paw withdrawal mechanical threshold, PWMT); 全自动热痛测试仪检测大鼠热痛觉缩足潜 伏期 (paw withdrawal thermal lathency, PWTL); ELISA 法检测血清中 TNF-α、 白介素 ( IL) -1β、 IL-6 水平 变化; Western 印迹检测各组大鼠脊髓组织单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1) 以及 TNF-α 表达水平。 结果 与 假手术组相比, 模型组大鼠 IL-1β、 IL-6 水平、 TNF-α、 MCP-1 表达均显著升高, PWMT 显著降低, PWTL 显著缩短 ( P < 0. 05); 与模型组相比, CSP-L 组、 CSP-M 组、 CSP-H 组大鼠 IL-1β、 IL-6 水平、 TNF-α、 MCP-1 表达均显著降低, PWMT 显著升高, PWTL 显著延长 (P< 0. 05); CSP-H 组各项指标与阳性对照组 差异无统计学意义 (P> 0. 05)。 结论 CSP 可以改善肺癌骨癌痛大鼠疼痛反应, 发挥止痛作用, 可能与抑 制 TNF-α 信号通路有关。 

目的 探讨丙泊酚 (propofol) 通过调控核转录因子-κB ( nuclear transcription factor-κB, NF-κB) 信号通路对活化的 BV2 细胞炎性因子的影响。 方法 将 BV2 细胞分为 5 组: 对照组、 模型组、 丙泊酚低剂 量组 (20 μmol / L)、 丙泊酚中剂量组 (50 μmol / L) 和丙泊酚高剂量组 (100 μmol / L)。 CCK-8 ( cell counting Kit-8) 实验检测细胞活力; ELISA ( enzyme linked immunosorbent assay) 实验检测白细胞介素-6 ( interleukin-6, IL-6)、 IL-1β、 肿瘤坏死因子 α ( tumor necrosis factor-α, TNF-α) 和一氧化氮合酶 ( nitric oxide synthase, NOS) 水平; 试剂盒检测活性氧 ( reactive oxygen species, ROS) 活性; Western 印迹检测核苷酸 结合寡聚化结构域样受体蛋白 3 (NOD-like receptor protein 3, NLRP3)、 凋亡相关斑点样蛋白 (apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC)、 半胱氨酸蛋白酶-1 (Caspase-1)、 IκB 和 P65 的表达及 P65 的磷酸化水平; 免疫荧光染色观察 P65 进入胞核的情况。 结果 3 种浓度丙泊酚对细胞活力无影响。 与 对照组比较, LPS 组的 IL-6、 IL-1β、 TNF-α、 ROS 和 NOS 水平显著上升 (P< 0. 01); IκB 的表达显著下调, p-P65 / P65 的表达显著上调, P65 入核表达显著增多 (P< 0. 01); 经过不同剂量丙泊酚处理 BV2 细胞后, 逆转了上述结果, IL-6、 IL-1β、 TNF-α、 ROS 和 NOS 水平显著降低 (P< 0. 01); IκB 的表达显著上调, pP65 / P65 的表达显著下调, 核定位的 P65 蛋白显著减少 (P< 0. 01), 且上述结果呈剂量相关性。 结论 丙 泊酚可通过调节 NF-κB 信号通路减缓活化的 BV2 细胞中的炎性因子的表达。 

目的 研究丙泊酚调控 SFRP1-Wnt 信号通路抑制肠癌细胞增殖侵袭的作用机制。 方法 肠癌细 胞 SW620 及 HT29 分为对照组及丙泊酚组, CCK-8 检测细胞增殖活性, 细胞划痕实验和 Transwell 小室分析 细胞转移和侵袭能力, 逆转录实时荧光定量 PCR 检测 Wnt 信号通路相关基因, 染色质免疫沉淀技术分析 EZH2 及 H3K27Me3 在 SFRP1 启动子区的富集程度。 结果 CCK-8 细胞增殖试验表明肠癌细胞 SW620 及 HT29 丙泊酚处理 24 h 后, 丙泊酚组增殖活性显著低于对照组细胞 (P< 0. 01)。 细胞划痕实验表明丙泊酚 组细胞迁移愈合面积显著低于对照组 (P< 0. 01)。 Tranwell 小室实验发现, 丙泊酚组穿膜细胞数量显著低 于对照组 (P< 0. 01)。 qPCR 检测发现丙泊酚组肠癌细胞较对照细胞, E-cadherin 显著上调 (P< 0. 01), 而 N-cadherin 表达减低 (P< 0. 01); Wnt 信号通路靶基因 β-catenin、 c-Myc 及 Cyclin D1 与对照组比较明显下调 (P< 0. 01); Wnt 上游调节因子 SFRP1 也出现了显著表达下调 (P< 0. 01)。 染色质免疫沉淀揭示丙泊酚组 细胞的 EZH2、 H3K27Me3 在 SFRP1 启动子富集程度显著低于对照组细胞 (P< 0. 01)。 结论 丙泊酚具有抑 制肠癌细胞增殖和侵袭活性。 丙泊酚通过减弱 EZH2 对 SFRP1 表观沉默作用, 诱导其表达上调, 从而减低 Wnt 信号通路活性。

目的 探究硬脂酰辅酶 A 去饱和酶 1 (stearoyl-CoA desaturase 1, SCD1) 改善 IL-1β 引起的胰岛 β 细胞功能损伤的效应。 方法 将 SCD1 基因插入 pEGFP-C1 载体中, 构建 pEGFP-SCD1 过表达质粒, 将该 质粒转染进胰岛 β 细胞系 INS-1 和 βTC-6 细胞后, 用 IL-1β 处理上述细胞, 借助于蛋白免疫印迹、 Tunel 染 色、 葡萄糖/ 氯化钾刺激的胰岛素分泌实验 (GSIS / KSIS) 等方法研究 SCD1 对胰岛 β 细胞的保护作用。 结 果 IL-1β 处理后降低了胰岛 β 细胞 SCD1 的表达, 过表达 SCD1 可逆转 IL-1β 处理引起的胰岛 β 细胞胰岛 素合成和分泌下降以及凋亡增加的效应。 结论 SCD1 能够保护胰岛 β 细胞免受 IL-1β 造成的功能损伤。

肾素血管紧张素系统 (renin-angiotensin system, RAS), 由数十种血管紧张素肽、 肽酶和多种受 体组成, 特异性调节各组织器官功能, 维持水电解质的稳态平衡。 局部 RAS 组分广泛分布在人眼的组织结 构中, 并产生一系列生理及病理作用。 文章就 RAS 系统的主要活性因子成分, 及其如何维持原发性开角型 青光眼 (primary open angle glaucoma, POAG) 小梁组织正常生理功能及房水正常动力学状态, 以及其作为 治疗青光眼的潜在药物靶点的前景进行综述。