医学分子生物学杂志 ›› 2022, Vol. 19 ›› Issue (2): 115-120.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2022.02.004
摘要: 目的 探讨 miR-183-5p 在斑马鱼 (Danio rerio) 胚胎成纤维 (ZF4) 细胞低温适应中的表达情况 与作用机制。 方法 RT-qPCR 检测 ZF4 细胞中 miR-183-5p 的表达, 使用靶基因预测数据库 Targetscan Fish 预测 miR-183-5p 的靶基因, Turbofect 转染试剂对 miR-183-5p 模拟物/ miRNA 阴性对照 (miR-183-5p mimics/ miR-NC) 进行转染, 并进行后续 CCK-8 法细胞活力检测实验和双荧光素酶活性报告实验。 结果 18 ℃ 低 温培养 30 d 后 ZF4 细胞中 miR-183-5p 的表达量显著升高, 且细胞活力检测实验发现过表达 miR-183-5p 可 增强低温下 ZF4 细胞活力; miR-183-5p 的保守性分析显示其在物种间高度保守, 使用生物信息方法与 RTqPCR 预测并初步验证了 miR-183-5p 潜在的靶基因, 双荧光素酶活性报告实验进一步验证了 miR-183-5p 可 与 egr1 的 3′UTR 结合。 结论 miR-183-5p 可能通过 egr1 在斑马鱼细胞低温适应过程中起到保护作用, 这为 进一步探索斑马鱼低温适应机制奠定了基础, 并为低温治疗的分子机制研究提供了新思路。
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