摘要：
目的 探究低温压力下 DNA 甲基转移酶 1 ( DNA methyltransferase 1, DNMT1) 的作用。
方法 以斑马鱼胚胎成纤维样细胞 (zebrafish embryonic fibroblast like cell line, ZF4) 为研究对象, 检测 ZF4 细胞低温下 dnmt1 的表达变化, 并构建靶向 dnmt1 的 shRNA 通过慢病毒在 ZF4 细胞中敲低 dnmt1, 进一步检测敲低 dnmt1 对于低温下 ZF4 细胞全基因组 DNA 甲基化、 细胞存活率和凋亡相关基因表达的影响。
结果 18 ℃低温压力下 ZF4 细胞中 dnmt1 的 mRNA 表达量升高, 在处理第 3 天达到顶峰。 sh-dnmt1 慢病毒可以有效下调 ZF4 细胞中 dnmt1 的表达。 低温压力下, ELISA 结果显示 dnmt1 敲低后细胞全基因组 DNA 甲基化水平显著下调 (P< 0. 05), 台盼蓝染色显示细胞存活率显著升高 ( P< 0. 001), RT-qPCR 结果显示凋亡相关基因bax 表达量显著下调 ( P < 0. 001)、 bcl-2 表达量显著上调 ( P < 0. 001)、 caspase-3 表达量显著下调 ( P <0. 01)。
结论 低温压力下敲低 dnmt1 对 ZF4 细胞具有保护作用, 而且 DNA 甲基化水平降低、 细胞凋亡受到抑制可能与其保护作用相关, 研究结果可为后期研究人类低温耐受的分子机制提供新线索。
中图分类号:
