目的 探讨巨噬细胞分化模型中 BVR 的表达情况 方法 体外培养 L929 细胞 2 d, 收集 L929 细 胞上清, 用此培养基来体外培养小鼠骨髓来源巨噬细胞 7 d, 分别用 LPS 100 ng / mL 和 IFN-γ 100 ng / mL、 IL-4 10 ng / mL 和 IL-13 10 ng / mL 刺激 24 h 后收集细胞。 用 Western 印迹检测 INOS 和 ARG-1 的表达; 用流 式细胞术检测 CD45、 F4 / 80、 CD11b、 CD86 和 DECTIN-1 的表达; 用 RT-PCR 检测 INOS、 ARG-1、 FN 和 FIZZ1 的表达来判断 M1 和 M2 的模型是否建立成功, 然后在巨噬细胞模型中检测 BVR 的表达。 同时在 RAW264. 7 细胞系构建的巨噬细胞分化模型中检测 BVR 的表达。 结果 ① Western 印迹发现 LPS 和 IFN-γ 组 (M1 巨噬细胞) INOS 表达增加, IL-4 和 IL-13 组 (M2 巨噬细胞) ARG-1 表达增加; ② 流式细胞术发 现 LPS 和 IFN-γ 组巨噬细胞中 CD86 表达增加, IL-4 和 IL-13 组巨噬细胞中 DECTIN-1 表达增加; ③ RT-PCR 发现 LPS 和 IFN-γ 组巨噬细胞中 INOS 和 TNF-α 表达增加; IL-4 和 IL-13 组巨噬细胞中 ARG-1、 FN 和 FIZZ1 表达增加; ④ RT-PCR 发现在小鼠骨髓来源的巨噬细胞和 RAW264. 7 细胞系巨噬细胞分化模型中 BVR 均在 M1 表达降低, 在 M2 中表达增加。 结论 ① LPS 和 IFN-γ, IL-4 和 IL-13 刺激小鼠骨髓来源巨噬细胞构建 M1 和 M2 模型成功; ② BVR 在小鼠骨髓来源巨噬细胞和小鼠单核巨噬细胞系构建的巨噬细胞分化模型中 均在 M1 中表达降低, 在 M2 中表达增加。

目的 探讨 miR-485 对脑缺血再灌注损伤 (CI/ R) 和氧糖剥夺/ 复供 (OGD/ R) 诱导 BV2 细胞 凋亡的影响。 方法 在体实验: 通过线栓法制备大鼠 CI/ R 损伤模型, 给予尾静脉注射 agomir-485 干预, 观 察大鼠再灌注 24 h 时脑损伤情况。 离体实验: 构建 miR-485 过表达 BV2 细胞系并给予 OGD/ R 诱导, 观察 细胞凋亡、 氧化应激情况。 结果 在体实验结果显示, CI/ R 大鼠脑组织 miR-485 表达水平降低, agomir-485 干预可降低 CI/ R 大鼠神经损伤、 Bax / Bcl-2 水平和 LDH、 GSH-px 活性, 提高 SOD 活性。 离体实验结果 显示, OGD 诱导会降低 miR-485 表达, miR-485 过表达可提高细胞 SOD 活性, 降低细胞凋亡率和 LDH、 GSH-px 活性。 结论 miR-485 过表达可缓解 CI/ R 损伤、 降低 OGD/ R 所致神经细胞凋亡率, 可能与调节氧 化应激反应有关。 

目的 探究 miR-27b-3p 在口腔鳞癌 (oral squamous cell carcinoma, OSCC) 耐药细胞增殖、 凋亡和顺铂 (cisplatin, DDP) 耐药性中的作用及潜在的机制。 方法 RT-qPCR 检测 miR-27b-3p 和 HOXB8 mRNA 的表达; Western 印迹分析 HOXB8 及耐药蛋白 MRP1 的表达; CCK-8 分析细胞活力, 克隆形成实验分析 细胞增殖, 流式细胞仪检测细胞凋亡。 miR-27b-3p 和 HOXB8 之间的相互作用通过在线软件 Targetscan 预测 并通过双荧光素酶报告基因分析证实。 裸鼠异种移植模型测试 miR-27b-3p 在体内 OSCC DDP 耐药中的作 用。 结果 miR-27b-3p 在 DDP 耐药 OSCC 组织和 OSCC 细胞系中明显低表达, 且在 DDP 耐药 OSCC 细胞系 (CAL-27 / DDP) 中的表达明显低于正常 OSCC 细胞系 (CAL-27) (P< 0. 05); 而 HOXB8 mRNA 在 DDP 耐药 OSCC 组织和 OSCC 细胞系中明显高表达, 在 DDP 耐药 OSCC 细胞系 (CAL-27 / DDP) 中的表达明显高于正 常 OSCC 细胞系 (CAL-27) (P< 0. 05)。 miR-27b-3p 模拟物可明显抑制 CAL-27 / DDP 细胞活力、 克隆形成能 力和耐药蛋白 MRP1 的表达, 促进细胞凋亡 (P< 0. 05); 而 HOXB8 过表达可部分逆转 miR-27b-3p 模拟物 对 CAL-27 / DDP 细胞增殖、 凋亡以及耐药性的影响 (P< 0. 05)。 HOXB8 与 miR-27b-3p 存在靶向调控作用。 瘤内注射 miR-27b-3p agomir 显著缓解了体内异种移植耐药细胞的生长, 同时降低了 HOXB8 和 MRP1 的表 达 (P< 0. 05)。 结论 miR-27b-3p 可能通过靶向 HOXB8 调节 OSCC 耐药细胞的增殖、 凋亡和 DDP 耐药性。

目的 研究罗哌卡因对脑缺血再灌注 (CI/ R) 大鼠脑损伤和海马神经元凋亡的缓解作用及其相 关通路。 方法 Sprague-Dawley (SD) 大鼠分组: 对照组, CI/ R 模型组, 罗哌卡因治疗组 [低浓度 (0. 5 mg / kg)、 中浓度 (1 mg / kg)、 高浓度 (2 mg / kg)]。 跳台实验和 Y 迷宫实验评价各组大鼠行为学; Longa 法 评价大鼠神经功能损伤; HE 染色观察脑组织病理损伤; TUNEL 染色检测海马区组织凋亡; Western 印迹检 测相关蛋白的表达。 结果 与对照组比较, CI/ R 组大鼠跳台试验犯错次数显著增加, 新异臂进入次数显著 降低, 脑指数和神经功能缺损评分显著升高; 脑组织出现明显的病理损伤, 海马区神经元明显凋亡; BDNF 和 NGF 蛋白表达显著降低, Bax / Bcl-2 和 cleaved Caspase-3 / Caspase-3 比值显著升高, P38MAPK 和 NF-κB P65 磷酸化水平显著提升。 与 CI/ R 组比较, 罗哌卡因治疗改善了 CI/ R 损伤引起的行为学偏差; 显著降低 脑指数和神经功能缺损评分; 缓解脑组织损伤和海马体神经元凋亡; 抑制了 P38MAPK/ NF-κB P65 通路的 活化。 结论 罗哌卡因治疗可缓解 CI/ R 大鼠脑损伤和海马神经元凋亡, 其潜在机制或与抑制 MAPK 通路 的活化有关。

目的 探究长链非编码 RNA (long non-coding RNA, lncRNA) OSTN 反义 RNA1 (OSTN antisense RNA1, OSTN-AS1) 对前列腺癌 LNCaP 细胞增殖、 迁移和侵袭的影响及其机制。 方法 以前列腺上皮细胞 RWPE-1 为对照, 实时荧光定量 PCR ( qRT-PCR) 法检测 LNCaP 细胞中 OSTN-AS1、 miR-4461 表达。 转染 OSTN-AS1 小干扰 RNA (si-OSTN-AS1) 或 miR-4461 模拟物、 或共转染 si-OSTN-AS1 与 miR-4461 抑制剂至 LNCaP 细胞, 细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 法、 划痕实验、 Transwell、 蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、 迁 移、 侵袭及相关蛋白 [Ki-67、 基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase, MMP) -2、 MMP-9] 表达。 双荧 光素酶报告基因实验验证 OSTN-AS1 与 miR-4461 的调控关系。 结果 LNCaP 细胞中 OSTN-AS1 表达量较 RWPE-1 细胞升高 (3. 38 ± 0. 26 vs. 1. 00 ± 0. 00, P< 0. 05), miR-4461 表达量较 RWPE-1 细胞降低 (0. 46 ± 0. 04 vs. 1. 00 ± 0. 00, P< 0. 05)。 干扰 OSTN-AS1 或过表达 miR-4461 后, LNCaP 细胞增殖活性、 划痕愈合 率、 侵袭数降低, 同时细胞中 Ki-67、 MMP-2、 MMP-9 蛋白表达量也降低 (P均 < 0. 05)。 OSTN-AS1 靶向结 合 miR-4461, 且干扰 OSTN-AS1 表达的 LNCaP 细胞中 miR-4461 表达量增加 (P< 0. 05)。 下调 miR-4461 逆 转了干扰 OSTN-AS1 对 LNCaP 细胞增殖、 迁移、 侵袭及相关蛋白表达的影响。 结论 干扰 OSTN-AS1 可通 过靶向上调 miR-4461 抑制前列腺癌 LNCaP 细胞增殖、 迁移和侵袭。

目的 探究脑胶质瘤微小核糖核酸 microRNA-340 (miR-340) 与 IDH1、 P53、 CD34、 Ki-67 表达 的关系以及初步探索 miR-340 对胶质瘤细胞功能和葡萄糖转运蛋白 1 / 6 ( glucose transporter 1 / 6, GLUT1 / 6) 表达的影响。 方法 采用实时荧光定量 PCR ( qRT-PCR) 法检测脑胶质瘤组织标本及胶质瘤细胞系 miR-340 的表达水平; 细胞功能试验检测 miR-340 对胶质瘤的影响; qRT-PCR、 蛋白质免疫印迹检测转染 miR-340 对 GLUT1 / 6 表达的影响。 结果 miR-340 在正常脑组织中高表达, 胶质瘤组织中低表达 (P< 0. 001); miR-340 mimics 可以抑制 U87、 U251 细胞增殖、 增加凋亡、 减弱迁移侵袭。 miR-340 mimics 可以显著抑制 胶质瘤细胞中 GLUT1 / 6 的表达 (P< 0. 001)。 结论 胶质瘤 miR-340 水平降低, 且与 Ki-67 表达呈明显负相 关。 miR-340 通过降低胶质瘤中 GLUT1 / 6 表达从而影响胶质瘤葡萄糖转运以抑制增殖, 降低恶性程度。

目的 探究甘草酸对脑缺血再灌注神经元损伤的保护作用。 方法 通过在大鼠原代神经元中进 行氧糖剥夺再灌注 (oxygen glucose deprivation reperfusion, OGD/ R) 构建体外脑缺血再灌注模型。 显微镜观 察细胞形态学变化, 免疫荧光染色观察神经元特异性烯醇化酶 (neuron-specific enolase, NSE) 的表达。 使 用甘草酸对损伤神经元进行治疗, CCK-8 法检测神经元细胞的活力变化, 乳酸脱氢酶 (LDH) -细胞毒性检 测试剂盒检测神经元释放的 LDH 水平。 使用 AMPK 激活剂 AICAR 对神经元 AMPK/ mTOR 通路进行激活, Western 印迹检测 AMPK/ mTOR 通路相关蛋白及自噬相关蛋白的表达。 结果 甘草酸抑制 OGD/ R 诱导的神 经元 LDH 水平升高、 细胞活力下降及自噬相关蛋白 Beclin 1、 LC3-Ⅱ的增加, 并抑制 AMPK/ mTOR 通路的 激活。 结论 甘草酸介导 AMPK/ mTOR 通路抑制神经元自噬从而对脑缺血再灌注后神经元发挥保护作用。

目的 探讨肥胖相关蛋白 (obesity-associated protein, FTO) 和 F 框/ WD-40 域蛋白 7 (F-box and WD-40 domain protein 7, FBXW7) 在宫颈鳞状细胞癌 (cervical squamous cell carcinoma, CSCC) 放化疗抵抗 中的作用。 方法 实时荧光聚合酶链反应 (real-time polymerase chain reaction, RT-PCR) 和 Western 印迹检 测 CSCC 细胞中 FTO 和 FBXW7 表达。 TCGA (The Cancer Genome Atlas) 数据分析 FTO 和 FBXW7 表达及相 关性。 在 CSCC 细胞中过表达 FTO, 免疫沉淀检测 FBXW7 的 mRNA 的 m6A 表达变化。 四甲基偶氮唑盐比 色法 [3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazolium bromide, MTT] 检测 FTO 和 FBXW7 在 CSCC 细胞放化疗抵抗中的作用。 结果 与人正常宫颈上皮细胞 (HUCEC) 比较, FTO 和 FBXW7 在 CSCC 细胞 (SiHa, c-33a) 中弱表达 (P< 0. 05); FTO 调控 FBXW7 的 mRNA 的 m6A 甲基化水平。 过表达 FTO 的 CSCC 细胞在经过照射和顺铂处理后, 细胞存活比例下降, 放化疗抵抗减轻 ( P< 0. 05); 而在此基础上抑制 FBXW7, 治疗后的细胞存活比例增加, 诱导了 CSCC 放化疗抵抗 (P< 0. 05)。 结论 FTO 可以去除 FBXW7 的 m6A 甲基化修饰, 上调 FBXW7 的表达, 抑制 CSCC 对放化疗的抵抗。 FTO 对 CSCC 恶性表型的影响是通 过 FBXW7 实现的。 

目的 探讨核糖体结合蛋白 2 (Ribophorin Ⅱ, RPN2) 在胃癌组织中的表达和对患者生存的影 响。 方法 应用胃癌公共芯片数据、 RT-PCR、 Western 印迹以及免疫组化方法从 mRNA 和蛋白水平检测 RPN2 在胃癌组织中的表达, 分析 RPN2 的表达与胃癌患者的预后和临床病理参数的关系。 结果 公共芯片 数据分析和临床样本 PCR 验证发现, 与癌旁组织相比, 胃癌组织中 RPN2 mRNA 的表达均明显升高 (P< 0. 05); Western 印迹和免疫组化检测发现, RPN2 蛋白在胃癌组织中表达明显上调; 进一步分析发现, 胃 癌组织中 RPN2 高表达与肿瘤分化程度 (P = 0. 005)、 淋巴结转移 (P = 0. 043)、 TNM 分期 (P = 0. 002)、 脉管浸润 (P = 0. 015) 和神经侵犯 (P = 0. 046) 相关; RPN2 高表达胃癌患者的总生存期显著少于低表达 组 (χ 2 = 9. 296, P = 0. 002); RPN2 高表达是胃癌患者总生存期的影响因素之一 ( HR = 1. 763, 95 % CI: 1. 106 ~ 3. 956, P = 0. 014)。 结论 RPN2 在胃癌中表达显著升高, RPN2 的高表达与胃癌的进展和预后相 关, 有望成为评估胃癌预后的标志物。

目的 检测 COX7B2 在转移性卵巢癌中的表达, 探究其表达模式, 判断 COX7B2 对卵巢癌预后 的影响, 分析其作为卵巢癌诊断标志物的潜在价值。 方法 挖掘 TCGA 数据库中 COX7B2 的 RNA 表达数 据, 对邯郸市中心医院卵巢癌样本组织蜡块进行免疫组织化学染色, 分析蛋白表达。 结合生存数据进行临 床分期和预后分析。 分析 COX7B2 表达与免疫细胞浸润的相关性。 结果 COX7B2 在卵巢癌组织中高表达, 且转移性卵巢癌的表达更为显著。 COX7B2 的表达与患者组织学分级、 病理分期、 淋巴结转移、 远端转移 相关, 与患者生存时间呈负相关。 COX7B2 对于卵巢癌的诊断具有较高的准确性。 COX7B2 抑制 T 细胞、 NK 细胞、 DC 细胞在肿瘤微环境中的浸润。 结论 COX7B2 在卵巢癌中的高表达, 影响患者的预后, COX7B2 有望作为卵巢癌的诊断标志物, 以及卵巢癌转移的特征性标志物。 

目的 研究抑制下丘脑 TLR4 表达对肥胖相关代谢状态的影响。 方法 40 只 4 周龄雄性 C57BL/ 6 小鼠 (SPF 级), 适应性喂养 1 周后, 随机分成 2 组, 分别饲喂正常饮食 (NCD)、 高脂饮食 (HFD) 4 周, 喂养期间, 每周测量体重 1 次。 9 周龄时, shRNA-TLR4 慢病毒颗粒及对照病毒颗粒分别注射正常饮食组和 高脂饮食组小鼠。 13 周龄时处死小鼠, 并采用实时荧光定量 qPCR 方法, 检测 TLR4 在下丘脑中的表达水 平; 血糖仪检测小鼠空腹血糖; ELISA 法检测血清 TNF-α、 IL-6; 应用自动生化分析仪检测血清低密度脂蛋 白-胆固醇、 高密度脂蛋白-胆固醇、 甘油三脂及总胆固醇水平; 脂肪组织 HE 染色。 结果 TLR4-shRNA 慢 病毒干预后, 下丘脑组织中 TLR4 的表达显著减少, 差异有统计学意义 (P< 0. 05); 高脂喂养的 C57BL/ 6 小鼠的体重增长量、 能量摄入量均明显降低, 差异有统计学意义 (P< 0. 05); 高脂喂养的 C57BL/ 6 小鼠的 炎性因子、 甘油三酯、 空腹血糖明显下降, 差异有统计学意义 (P< 0. 05)。 脂肪细胞肥大现象缓解。 结论 通过有效干预下丘脑组织中 TLR4 的表达水平, 可显著改善肥胖相关的炎性反应、 糖、 血脂等代谢紊乱。 

目的 口腔鳞状细胞癌 (oral squamous cell carcinoma, OSCC) 是一种复发率高、 转移率高、 预 后差的常见癌症, 研究旨在深入了解 RABL6 在 OSCC 肿瘤发生和发展及预后中的作用。 方法 采用定量逆 转录聚合酶链反应 (qRT-PCR) 和 Western 印迹检测 37 例冷冻临床样本和 OSCC 细胞中 RABL6 的表达。 分析 RABL6 的表达及其与临床病理特征的相关性。 通过 CCK-8、 克隆形成、 流式细胞术、 细胞划痕和 Transwell 实验, 研究 RABL6 基因敲低对 OSCC 细胞增殖、 凋亡和迁移能力的影响。 结果 与癌旁组织相比, RABL6 在 OSCC 组织中高表达, 与预后不良相关; 与正常口腔角质形成细胞相比, RABL6 在 OSCC 细胞中 高表达; 与 si-NC 组比较, 敲低 RABL6 抑制了 OSCC 细胞的增殖、 迁移和侵袭, 还能诱导细胞凋亡。 结论 RABL6 在 OSCC 中作为肿瘤癌基因发挥作用。 提示可作为预测预后的潜在生物标志物, 也是 OSCC 治疗 的新靶点。

目的 探讨翠云草总黄酮 ( total flavonoids from Selaginella uncinata, TFS) 对喉鳞癌 TU177 细胞 增殖、 迁移和侵袭的影响及可能机制。 方法 体外培养 TU177 细胞, 分为对照组、 不同剂量 (5、 15、 25 μg / mL) TFS 组, CCK-8 法和克隆形成实验检测细胞增殖, 划痕实验检测细胞迁移, Transwell 检测细胞侵 袭, Western 印迹检测细胞中上皮型钙粘蛋白 (E-Cadherin)、 神经型钙粘蛋白 (N-Cadherin) 表达, RT-qPCR 法检测 miR-3662 表达。 收集 35 例喉鳞癌患者的癌组织及癌旁组织, RT-qPCR 法检测组织中 miR-3662 表达。 另取 TU177 细胞, 分为 miR-3662 组、 miR-NC 组、 25 μg / mL TFS + anti-miR-3662 组和 25 μg / mL TFS + anti-miR-NC, CCK-8 法和克隆形成实验检测细胞增殖, 划痕实验检测细胞迁移, Transwell 检测细胞侵袭, Western 印迹检测细胞中 E-Cadherin 和 N-Cadherin 蛋白表达。 结果 与对照组比较, 不同剂量 TFS 组 TU177 细胞抑制率升高 (P< 0. 05), 克隆形成数、 划痕愈合率和侵袭数及细胞中 N-Cadherin 蛋白表达降低 (P< 0. 05), E-Cadherin 蛋白和 miR-3662 表达升高 (P< 0. 05), 且呈剂量依赖性。 喉鳞癌组织中 miR-3662 的表 达较癌旁组织显著降低 (P< 0. 05)。 与 miR-NC 组比较, miR-3662 组喉鳞癌 TU177 细胞抑制率和细胞中 E-Cadherin 蛋白表达升高 (P< 0. 05), 克隆形成数、 迁移和侵袭数及细胞中 N-Cadherin 蛋白表达均降低 (P< 0. 05)。 与 25 μg / mL TFS + anti-miR-NC 组比较, 25 μg / mL TFS + anti-miR-3662 组 TU177 细胞抑制率和细胞 中 E-Cadherin 蛋白表达降低 (P< 0. 05), 克隆形成数、 迁移和侵袭数及细胞中 N-Cadherin 蛋白表达均升高 (P< 0. 05)。 结论 翠云草总黄酮可抑制喉鳞癌 TU177 细胞增殖、 迁移和侵袭, 其作用机制可能与上调细 胞中 miR-3662 表达有关。

microRNA (miRNA) 是一类长度为 20 ~ 24 个核苷酸的非编码单链 RNA, 被称为转录后调控因 子。 miRNA 是在转录后调控其靶基因发挥作用。 miRNA 表达的改变在多种疾病的发生发展过程中发挥重要 的调控作用。 其中, microRNA124 (miR-124) 是目前的研究热点之一, 它在多种肿瘤中低表达, 并在细胞 增殖、 侵袭转移及凋亡等方面发挥重要的抑癌作用, 密切参与恶性肿瘤的发生、 发展和预后。 文章综述了 非恶性疾病与恶性疾病中 miR-124 的作用机制, 为疾病的诊断与治疗提供理论证据。

近年来, 环状 RNA 在肿瘤治疗中的作用成为了研究热点。 糖酵解是肿瘤代谢中的一个重要环 节, 许多异常表达的环状 RNA 与肿瘤糖酵解过程中重要的酶类、 细胞因子及信号通路都有密切的联系, 它 可通过结合 microRNA 抑制其功能, 直接或间接影响下游靶蛋白的表达, 达到促进或抑制肿瘤糖酵解过程, 还可影响肿瘤患者对化疗药物产生的耐药性。 文章综述了环状 RNA 通过葡萄糖转运蛋白及代谢酶、 相关癌 基因及转录因子、 癌症相关信号通路影响肿瘤糖酵解, 以及其在肿瘤治疗和耐药等方面的研究进展。