医学分子生物学杂志 ›› 2023, Vol. 20 ›› Issue (4): 332-338.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2023.04.009
摘要: 目的 探究调控食管癌细胞糖酵解的机制。 方法 逆转录实时定量 PCR ( quantitative real-time, qRT-PCR) 法 分 别 检 测 环 状 RNA 溶 血 磷 脂 酸 受 体 ( circular RNA lysophosphatidic acid receptor 3, CircLPAR3), 微小 RNA-143-5 (microRNA-143-5p, miR-143-5p) 和泛素特异性蛋白酶 14 ( ubiquitin-specific protease 14, USP14) 的表达水平; 使用 Seahorse XF 24 细胞外通量分析仪测量细胞外酸化率 ( extracellular acidification rate, ECAR) 和耗氧率 (oxygen comsumpition rate, OCR); Western 印迹法检测糖酵解途径关键 酶 HK2 的表达水平; 使用 Starbase 数据库预测 CircLPAR3 与 miR-143-5p 以及 miR-143-5p 与 USP14 的靶向结 合位点, 双荧光素酶试验验证 CircLPAR3 和 miR-143-5p 以及 miR-143-5p 与 USP14 的靶向关系。 结果 与正 常人食管上皮细胞 (normal human esophageal epithelial cells, Het-1A) 组比较, 食管癌细胞系中 CircLPAR3 高表达, 且 KYSE450 细胞系的表达最高, 同时 miR-143-5p 低表达而 USP14 高表达。 与 Het-1A 组比较, KYSE450 组 HK2 的蛋白表达水平增加, 同时细胞 ECAR 增加, 整体糖酵解 OCR 减少; 敲低 CircLPAR3 的 表达导致细胞 HK2 的蛋白表达水平减少, ECAR 减少, 整体糖酵解 OCR 增加; 在抑制 CircLPAR3 的表达情 况下, 抑制 miR-143-5p 的表达能够部分逆转细胞的糖酵解途径; 双荧光素酶实验验证了 CircLPAR3 和 miR-143-5p 的靶向关系, 以及 miR-143-5p 和 USP14 的靶向关系。 结论 CircLPAR3 能够通过调控 miR-143-5p / USP14 通路调节食管癌细胞糖酵解途径。
中图分类号: