目的 基于 NF-κB 通路探讨绿萝花黄酮治疗 DPN 小鼠的机制。 方法 将 60 只小鼠分为对照组、 模型组、 绿萝花黄酮低、 中和高剂量组、 阿卡波糖组各 10 只。 将小鼠雪旺细胞分为正常组、 LPS 组、 绿萝 花黄酮低、 中、 高剂量组。 比较各组小鼠神经传导功能指标、 热痛阈值、 炎性因子、 NF-κB 信号通路关键 蛋白及相关 mRNA 表达水平。 结果 绿萝花黄酮提高小鼠 MNCV、 SNCV 及热痛阈值, 降低炎性因子水平 (P < 0. 05); 降低 p-NF-κB P65 / NF-κB P65、 p-IKKβ/ IKKβ 蛋白比值, 提高 p-IκBα/ IκBα 蛋白比值 ( P < 0. 05); 下调 NF-κB P65、 IKKβ mRNA, 上调 IκBα mRNA (P < 0. 05)。 结论 绿萝花黄酮通过抑制 NF-κB 信号通路降低炎性因子释放, 减轻 DPN 小鼠病情。

目的 探讨青蒿琥酯 (artesunate, Art) 对牙髓干细胞 (dental pulp stem cells, DPSCs) 成骨分化 及腺苷活化蛋白激酶 (AMP-activated potein kinase, AMPK) / 核因子-κB ( nuclear factor kappa-B, NF-κB) 信号通路的影响。 方法 分离并鉴定 DPSCs, 成骨及成脂分化诱导评估多向分化潜能。 使用不同浓度的青 蒿琥酯处理 DPSCs 细胞, 细胞计数试剂 (cell counting Kit-8, CCK-8) 法检测细胞增殖活性; 将 DPSCs 细胞 分为对照组 (control)、 青蒿琥酯低浓度组 (Art-L)、 青蒿琥酯中浓度组 (Art-M)、 青蒿琥酯高浓度组 (Art-H), 碱性磷酸酶 ( alkalinephosphatase, ALP) 染色及茜素红 S 染色检测细胞 ALP 活性及细胞矿化结 节; Western 印迹法检测细胞骨桥蛋白 (osteopontin, OPN)、 Runt 相关转录因子 2 ( runt-related transcription factor 2, RUNX2)、 骨钙素 (osteocalcin, OCN) 及 AMPK/ NF-κB 通路相关蛋白表达水平。 结果 成功分离 DPSCs 细胞, 经鉴定具有多向分化潜能; 与 Control 组比较, 使用浓度为 3. 125、 6. 25、 12. 5 μmol / L 的 Art 处理 DPSCs 细胞后, 细胞 ALP 活性水平、 矿化结节数、 OPN、 RUNX2、 OCN、 p-AMPK 蛋白表达水平显著 升高 (P< 0. 05), p-NF-κB P65 蛋白表达水平显著降低 (P< 0. 05)。 结论 青蒿琥酯可促进牙髓干细胞成 骨分化, 可能与调控 AMPK/ NF-κB 信号通路有关。

目的 探讨 lncRNA SNHG17 对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。 方法 qRT-PCR 检测正常胎盘组织、 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 和 miR-525-5p 表达。 体外培养人绒 毛膜滋养层细胞 HTR-8 / SVneo, 分别转染 si-SNHG17、 anti-miR-525-5p 及其阴性对照; 采用平板克隆形成实 验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 迁移及侵袭能力; 双荧光素酶报告实验检测 miR-525-5p 与 SNHG17 的靶向关系。 结果 与正常胎盘组织比较, 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 表达升高, miR-525-5p 表达降低 (P< 0. 05)。 转染 si-SNHG17 后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多, 划痕愈合率升高 (P< 0. 05)。 lncRNA SNHG17 靶向调控 miR-525-5p; 共转染 si-SNHG17 和 anti-miR-525-5p 后细胞克隆形成数 和侵袭细胞数减少, 划痕愈合率降低 (P< 0. 05)。 结论 沉默 lncRNA SNHG17 可通过促进 miR-525-5p 表 达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、 迁移及侵袭。

目的 探究 CD168 对口腔鳞状细胞癌增殖、 侵袭的作用机制。 方法 比较人正常口腔角质细胞 系 HOK 与不同口腔鳞癌细胞株间 CD168 表达差异, 选择 HN13 细胞株作为研究对象, 感染慢病毒 shRNA 载体后, 实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 和 Western 印迹法检测 CD168 基因和蛋白表达检测干预效果, CCK-8 法检测细胞增殖情况, 流式细胞仪检测细胞凋亡率, Transwell 试验检测细胞侵袭情况, Western 印迹 检测细胞增殖、 凋亡、 侵袭以及 CXCL12-CXCR4 / CXCR7 信号轴相关蛋白表达。 结果 选择 HN13 细胞和 CD168-shRNA2 慢病毒载体进行后续实验 (P< 0. 05); 沉默 CD168 可使 HN13 细胞增殖、 侵袭数量减少, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), VEGF、 PCNA、 MMP-2、 MMP-9、 CXCL12、 CXCR4、 CXCR7 蛋白表达量降低 (P< 0. 05), Bax / Bcl-2 比值升高 (P< 0. 05), shRNA-NC 组变化无统计学意义 (P> 0. 05)。 结论 靶向沉 默 CD168 可抑制口腔鳞状癌细胞 HN13 增殖、 侵袭, 促进其凋亡, 可能与 CXCL12-CXCR4 / CXCR7 信号轴 有关。

目的 通过实验研究确认环状 RNA (circRNA) circ_ 0061140 是否能靶向 miR-6838-5p 调控非小 细胞肺癌细胞的增殖、 细胞周期和凋亡。 方法 采用逆转录-定量聚合酶链反应 (RT-qPCR) 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 在非小细胞肺癌细胞中的表达情况。 将非小细胞肺癌 NCI-H1299 细胞分为 si-circ_ 0061140 组 (转染 si-circ_ 0061140; 低表达 circ_ 0061140)、 si-NC 组 (转染 si-NC; 阴性对照)、 NC 组 (未 转染; 空白对照)、 miR-6838-5p 组 (转染 miR-6838-5p 模拟物; 高表达 miR-6838-5p)、 miR-NC 组 (转染 miR-NC; 高表达 miR-6838-5p 的阴性对照)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-NC 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-NC)、 si-circ_ 0061140 + anti-miR-6838-5p 组 (共转染 si-circ_ 0061140 与 anti-miR-6838-5p)。 采用 Western 印迹检测细胞周期蛋白 D1 ( cyclinD1)、 活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 ( cleaved caspase-3) 蛋白表达, MTT 法检测细胞增殖能力, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。 双荧光素酶活性 检测 circ_ 0061140 和 miR-6838-5p 的靶向结合。 结果 非小细胞肺癌组织、 细胞 NCI-H1299、 NCI-H2170、 NCI-H1975 中的 circ_ 0061140 表达量均比癌旁组织或正常肺上皮细胞 BEAS-2B 高, miR-6838-5p 表达量比 癌旁组织或 BEAS-2B 细胞低 (P均 < 0. 05)。 si-circ_ 0061140 组或 miR-6838-5p 组 NCI-H1299 细胞的 CyclinD1 蛋白表达量、 增殖能力、 S 期细胞比例比 NC 组减少, Cleaved-caspase-3 蛋白表达量、 G0 / G1期细胞比 例、 凋亡率比 si-NC 组或 miR-NC 组增加 (P均 < 0. 05)。 circ_ 0061140 靶向调控 miR-6838-5p 的表达。 共转 染 si-circ_ 0061140、 anti-miR-6838-5p 可减弱转染 si-circ_ 0061140 对细胞生物学行为的作用。 结论 低表达 circ_ 0061140 通过靶向非小细胞肺癌细胞的 miR-6838-5p, 抑制细胞增殖、 阻滞 G0 / G1期细胞周期, 并加速 凋亡。

目的 探讨沉默有丝分裂相关激酶 2 ( never in mitosis related kinase 2, NEK2) 对非小细胞肺癌 (non-small cell lung cancer, NSCLC) 细胞生物学行为的影响及其可能机制。 方法 收集 27 对 NSCLC 和邻 近的正常组织, 免疫组化检测组织 NEK2 表达, 收集临床病理数据。 生物信息学分析研究 NEK2 在肺腺癌 中的表达和预后价值。 通过 NCI-H1299 和 A549 细胞体外转染 siRNA 敲低 NEK2, 通过免疫印迹及 qPCR 实 验验证敲低效果, CCK-8 评估细胞增殖能力, 流式细胞术评估细胞凋亡及周期, 蛋白印迹测定 Wnt 信号通 路相关蛋白表达。 结果 在肺腺癌组织中的 NEK2 表达显著高于癌旁组织, ⅡB-ⅢB 级组显著高于ⅠA-ⅡA 级组, 从 TCGA 数据库获得的数据也显示肺腺癌患者的 NEK2 明显高于相应的对照组, 并与预后不良显著 相关。 转染 NEK2 siRNA 显著降低了 NCI-H1299 和 A549 细胞的增殖, 细胞阻滞在 G0 / G1期, 细胞凋亡率增 加。 此外, 转染 NEK2 siRNA 的 NCI-H1299 和 A549 细胞中 Wnt 和 β-catenin 的表达水平显著下调, 而 p-GSK3β 的表达水平上调。 结论 siRNA 干扰 NEK2 的表达可抑制非小细胞肺癌细胞的增殖, 其机制可能是 通过抑制 Wnt / β-catenin 通路的促进细胞凋亡和周期阻滞。

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体 γ (PPAR-γ) 过表达对大鼠肾缺血再灌注 (RI/ R) 损 伤的保护作用, 并探讨其作用机制。 方法 将 40 只 SD 大鼠随机分为对照组、 RI/ R 模型组、 RI/ R + LV 组 和 RI/ R + PPAR-γ 组, 10 只/ 组, 采用手术阻断双侧肾动脉血流构建 RI/ R 损伤模型; RI/ R + PPAR-γ 组于 恢复再灌注前经尾静脉注射 PPAR-γ 重组慢病毒载体, RI/ R + LV 组注射含有空质粒的慢病毒载体, RI/ R 模型组注射等量生理盐水。 再灌注结束后, 通过 HE 和 Masson 染色观察肾组织病理改变; 全自动生化分析 仪检测尿蛋白、 血肌酐 ( Scr)、 血尿素氮 ( BUN) 水平; ELISA 法检测血清和肾组织肿瘤坏死因子 α (TNF-α)、 白介素 6 ( IL-6) 含量; RT-PCR 检测肾组织 PPAR-γ mRNA 表达; 蛋白质印迹法检测肾组织 PPAR-γ、 转化生长因子 β (TGF-β)、 α 平滑肌肌动蛋白 (α-SMA)、 纤维连接蛋白 (FN) 以及凋亡相关蛋 白 Bax、 Bcl-2、 caspase-3、 Cleaved caspase-3、 caspase-9、 Cleaved caspase-9 表达。 结果 与对照组比较, RI/ R 模型组 PPAR-γ 水平降低 (P< 0. 05), 尿蛋白、 Scr、 BUN、 TNF-α、 IL-6、 Bax / Bcl-2、 Cleaved caspase-3 / caspase-3、 Cleaved caspase-9 / caspase-9、 TGF-β、 α-SMA、 FN 水平升高 (P< 0. 05)。 与 RI/ R 模型组比较, RI/ R + PPAR-γ 组 PPAR-γ 水平升高 ( P< 0. 05), 尿蛋白、 Scr、 BUN、 TNF-α、 IL-6、 Bax / Bcl-2、 Cleaved caspase-3 / caspase-3、 Cleaved caspase-9 / caspase-9、 TGF-β、 α-SMA、 FN 水平降低 (P< 0. 05)。 结论 过表 达 PPAR-γ 可通过减少促炎细胞因子释放, 改善肾纤维化而减少 RI/ R 损伤。 

目的 探讨罗哌卡因 ( ropivacaine, Rop) 对脂多糖 ( lipopolysaccharide, LPS) 诱导的小鼠急性 肺损伤 (acute lung injury, ALI) 的作用及其机制。 方法 气管内滴注 LPS 诱导肺损伤小鼠模型, 并将小鼠 随机分为 6 组: 对照组、 LPS 组、 罗哌卡因 0. 25、 0. 5、 1 μmol / L 组和右美托咪定 (dexmedetomidine, Dex) 100 μg / kg 组。 Hematoxylin-eosin (H&E) 染色评估肺组织的组织病理学变化; ELISA 法测定肺组织中髓过 氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO)、 丙二醛 ( malondialdehyde, MDA)、 超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD) 和谷胱甘肽过氧化物酶 ( glutathione peroxidase, GSH-Px) 的活性; 检测血清中 IL-6、 IL-1β 和肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α) 的表达; Western 印迹检测 HMGB1 / NF-κB 通路相关蛋 白的表达。 结果 与对照组比较, LPS 诱导肺泡外膜增厚、 出血和肺水肿; 肺损伤评分和肺含水量增加; MPO 和 MDA 活性增加, SOD 和 GSH-Px 水平降低; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平升高; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平升高, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 与 LPS 组比较, 罗哌卡因 0. 5、 1 μmol / L 组小鼠肺损伤 程度明显减轻; MPO 和 MDA 活性降低, SOD 和 GSH-Px 水平升高; IL-6、 IL-1β 和 TNF-α 水平降低; HMGB1 蛋白和 NF-κB P65 磷酸化水平降低, 有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 罗哌卡因通过抑制 HMGB1 / NF-κB 通路, 有效减弱了 LPS 引起的肺组织损伤。

目的 研究活性氧簇 (ROS) 介导的氧化应激及细胞焦亡在大鼠脑缺血再灌注 ( I/ R) 损伤中的 作用。 方法 成年雄性 SD 大鼠分为假手术 ( Sham) 组、 I/ R 组、 ROS 清除剂 N 乙酰半胱氨酸-低剂量 (NAC-L) 组、 NAC 中等剂量 (NAC-M) 组、 NAC 高剂量 (NAC-H) 组, 建立脑 I/ R 损伤模型并给予 50、 100、 200 mg / kg NAC 腹腔注射干预。 再灌注后 24 h, 评价神经功能, 检测脑梗死面积百分比、 ROS、 丙二 醛 (MDA)、 4-羟基壬烯醛 (4-HNE)、 总抗氧化力 (T-AOC)、 裂解型 caspase-1 (Cleaved caspase-1)、 gasdermin D 的 N 端片段 (GSDMD-N)。 结果 I/ R 组脑梗死面积百分比、 ROS、 MDA、 4-HNE 含量、 Cleaved caspase-1、 GSDMD-N 表达水平均明显增加, T-AOC 含量明显降低 ( P < 0. 05 ); NAC-L 组、 NAC-M 组、 NAC-H 组脑梗死面积百分比、 ROS、 MDA、 4-HNE 含量、 Cleaved caspase-1、 GSDMD-N 表达水平均明显降 低, T-AOC 含量明显增加 (P< 0. 05) 且 NAC 剂量越高, 上述变化越显著。 结论 ROS 介导的氧化应激及 细胞焦亡参与大鼠脑 I/ R 损伤。

目的 探讨黄芪多糖通过调控微小 RNA-375 (microRNA-375, miR-375) 对人牙周膜干细胞生物 学特性的影响及其相关机制的研究。 方法 体外分离培养人牙周膜干细胞, 采用黄芪多糖浓度为 0、 40、 100、 400 μg / mL 进行处理 48 h, 记为不同浓度的黄芪多糖组; 将 anti-miR-NC 和 anti-miR-375 转染至人牙周 膜干细胞, 选取 400 μg / mL 的黄芪多糖进行处理, 记为黄芪多糖 + anti-miR-NC 组和黄芪多糖 + anti-miR-375 组。 通过噻唑蓝 ( methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT) 检测细胞增殖能力和碱性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP) 活性; 蛋白免疫印迹法 (Western blot) 检测 Runt 相关转录因子 2 (runt-related transcription factor 2, Runx-2)、 骨桥蛋白 ( osteopontin, OPN) 和骨钙素 ( osteocalcin, OCN) 的蛋白表达; 实时荧光定量聚合酶链式反应 ( real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR) 检测 miR-375 的表达。 结果 不同浓度的黄芪多糖组可以促进 miR-375 表达 (1. 54 ± 0. 16、 1. 92 ± 0. 20、 2. 54 ± 0. 22) (0. 92 ± 0. 07)、 细胞 A 值 [ (0. 46 ± 0. 05、 0. 58 ± 0. 07、 0. 72 ± 0. 06) 比 (0. 35 ± 0. 04), (0. 53 ± 0. 05、 0. 69 ± 0. 07、 0. 84 ± 0. 09) (0. 40 ± 0. 03)]、 ALP 活性 (0. 73 ± 0. 08、 0. 84 ± 0. 07、 1. 03 ± 0. 09) 比 (0. 32 ± 0. 03), Runx-2 (1. 32 ± 0. 11、 1. 51 ± 0. 14、 1. 83 ± 0. 17) (0. 92 ± 0. 07)、 OCN (1. 47 ± 0. 13、 1. 65 ± 0. 16、 1. 89 ± 0. 19) (0. 99 ± 0. 06)、 OPN (1. 53 ± 0. 15、 1. 72 ± 0. 16、 1. 99 ± 0. 20) (1. 00 ± 0. 04) 蛋白表达上调。 黄芪多糖 + anti-miR-375 组的 miR-375 的表达、 细胞 A 值、 ALP 活性, Runx-2、 OCN、 OPN 蛋白表达明显高于黄芪多糖 + anti-miR-NC 组。 结论 黄芪多糖可以促进人牙周膜干细胞的增殖和成骨分化能力, 其作用机制可能与 miR-375 有关。

目的 探究血清外泌体 lncRNA HOTTIP 在乳腺癌 (breast cancer, BC) 患者中的临床预后价值。 方法 采用试剂盒提取 98 例 BC 患者、 50 例良性乳腺疾病 (benign breast disease, BBD) 患者和 50 例健康 人血清中的外泌体; 采用 RT-qPCR 检测血清外泌体中 HOTTIP 的表达水平, 进一步分析 HOTTIP 表达与患 者临床病理学特征及总生存期的关系。 结果 BC 患者血清外泌体中 lncRNA HOTTIP 的表达水平明显高于 BBD 患者 (t = 8. 790, P< 0. 001) 和正常健康人 (t = 11. 540, P< 0. 001), 且手术后 BC 患者血清外泌体中 的 HOTTIP 水平显著降低 ( t = 14. 570, P< 0. 001)。 临床病理分析显示, 高血清外泌体 HOTTIP 水平与 HER2 表达水平、 淋巴结转移和 TNM 分期显著相关 (P均 ߹0. 05)。 生存分析表明, 血清外泌体 HOTTIP 高表 达组 BC 患者的 5 年生存率显著低于低表达组 ( χ 2 = 5. 548, P = 0. 019); 多因素分析显示, 血清外泌体 HOTTIP 高表达是导致 BC 患者预后不佳的独立危险因素 ( HR = 2. 454, 95 % CI: 1. 142 ~ 7. 005, P = 0. 031)。 结论 血清外泌体 lncRNA HOTTIP 在 BC 中表达上调, 其高表达提示肿瘤的恶性进展和患者的不 良预后, 有望成为 BC 患者预后评估的非侵入性生物标志物。

蛋白质糖基化 (protein glycosylation) 是一种广泛的翻译后修饰, 包括合成不同的多糖核心, 并 将其添加到蛋白质一致序列内的特定氨基酸中。 大多数糖蛋白从涉及内质网和高尔基体的分泌系统获得糖 基, 并分泌到与质膜相关的细胞壁或细胞外空间。 糖基化修饰可以通过影响糖蛋白的折叠、 分类、 定位、 丰度和活性来调节糖蛋白的功能。 近年来多项研究报道葡萄糖代谢影响糖基化修饰。 蛋白质糖基化修饰涉 及多种代谢疾病和肿瘤的发生, 己糖胺生物合成途径 ( hexosaminebiosynthesis pathway, HBP) 与机体代谢 和蛋白质糖基化修饰关系密切。 

尽管肾移植是治疗终末期肾病的最佳选择, 但是移植后的免疫排斥仍然是困扰临床的重大难题, 急性排斥反应是最常见的移植后免疫排斥反应。 移植医学在预防性筛查、 早期诊断、 改善预后和治疗等方 面正面临着新的特异性生物标记物的需求。 目前, 蛋白质组学的已经被广泛应用于移植医学的研究中, 血 清、 尿液中与肾移植后急性排斥反应相关生物标志物的筛选也取得越来越多的进展。 文章综述了基于质谱 技术的蛋白组学在肾移植后急性排斥反应相关的生物标志物筛选中的研究进展。 

近年来患有近视的人不断增多。 由于近视严重的并发症及发生逐渐低龄化, 其已成为我国重点 关注的问题。 多项研究显示, 随着近视的进展, 眼球壁会产生一些异常改变。 文章就近视眼球壁的异常改 变及其细胞分子机制进行综述, 为进一步研究近视发病机制和近视防控提供依据。