目的 探讨 miR-133b 靶向多聚嘧啶区结合蛋白1 (polyrimidine tract binding protein 1, PTBP1) 对 肾细胞癌 (renal cell carcinoma, RCC) 增殖和侵袭的影响。 方法 检测 miR-133b 在 RCC 癌组织及细胞中 的表达水平; 验证 miR-133b 与 PTBP1 的靶向关系及 miR-133b 表达对肾癌细胞 PTBP1 表达及增殖、 迁移的 影响。 结果 与癌旁组织比较, miR-133b 在 RCC 组织中表达下降, 而 PTBP1 上升 (P< 0. 05)。 PTBP1 是 miR-133b 的靶基因; 与 miR-NC 组比较, miR-133b mimic 组的克隆形成率、 侵袭细胞数目及 PTBP1 表达明 显下降, 而 miR-133b inhibitor 组上升; 与 miR-133b mimic + pc-NC 组比较, miR-133b mimic + pc-PTBP1 组的 克隆形成率、 侵袭细胞数目及 PTBP1 表达水平上升 (P< 0. 05)。 结论 miR-133b 在 RCC 癌组织及细胞中 表达下调, 且其可能通过调控 PTBP1 的表达水平来影响细胞的增殖和侵袭能力。

目的 探讨 miR-766-5p 对胶质瘤细胞增殖、 侵袭与凋亡的影响。 方法 Targetscan 预测 miR-766- 5p 与基质金属蛋白酶-7 (MMP-7) 靶向关系并进行验证, 构建 miR-766-5p 过表达、 MMP-7 过表达和 miR766-5p + MMP-7 过表达胶质瘤 U87 细胞系, BrdU 染色、 流式细胞法、 Transwell 实验、 Western 印迹分别检 测细胞增殖、 凋亡、 侵袭及相关蛋白表达。 结果 miR-766-5p 可靶向抑制 MMP-7 表达, miR-766-5p 过表达 可抑制 Ki67、 增殖细胞核抗原 (PCNA)、 Wnt1、 β-链蛋白 (β-catenin) 蛋白表达以抑制 U87 细胞增殖和侵 袭, 可促进 Bcl 相关 X 蛋白 (Bax) / B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 (Bcl-2) 蛋白表达以促进细胞凋亡, MMP-7 过表达可以缓解 miR-766-5p 过表达所致 U87 细胞增殖、 侵袭抑制作用和凋亡促进作用。 结论 miR-766-5p 可靶向抑制 MMP-7 表达抑制 U87 细胞胞增殖、 侵袭和促细胞凋亡。

目的 探究 lncRNA HOXB-AS3 对急性髓样白血病 (acute myeloid leukemia, AML) 的增殖、 凋亡 和侵袭的影响和机制。 方法 RT-qPCR 检测 AML 患者骨髓单核细胞 (BMMCs) 和细胞系中 lncRNA HOXB-AS3 相对表达量。 慢病毒转染建立稳定表达 shRNA-HOXB-AS3-01, shRNA-HOXB-AS3-02 和 shRNA-HOXB-AS3-03 的 THP1 和 HL60 细胞系。 CCK-8 实验、 EdU 实验、 流式细胞术实验和 Transwell 实验分别检测 THP1 和 HL60 细胞活力、 增殖、 凋亡和侵袭能力, Western 印迹检测蛋白相对表达量。 建立裸鼠 AML 移植瘤模 型, 体内验证 HOXB-AS3 低表达对肿瘤生长的影响。 结果 lncRNA HOXB-AS3 在 AML 患者 BMMCs 和细胞 系中的表达量显著增加。 在细胞实验中, HOXB-AS3 低表达显著抑制 THP1 和 HL60 细胞活力、 增殖和侵 袭, 增加细胞凋亡率, 上调 cleaved caspase-3、 cleaved caspase-9 和 E-cadherin 蛋白的表达, 下调 N-cadherin、 VEGF、 PI3Kp85α 和 p-AKT 蛋白的表达。 在体内实验中, HOXB-AS3 低表达显著抑制肿瘤生长, 下调 PI3Kp85α 和 p-AKT 蛋白表达。 结论 lncRNA HOXB-AS3 通过激活 PI3K-AKT 通路加剧 AML 细胞的增殖、 凋亡和侵袭。

目的 探讨鼠曲草提取物对前交叉韧带横断 ( anterior cruciate ligament transection, ACLT) 诱导 骨关节炎 (osteoarthritis, OA) 大鼠损伤的影响。 方法 选取 SPF 级健康雄性 SD 大鼠90 只, 按体重随机分 为假手术组、 模型组、 鼠曲草提取物低剂量组 (400 mg / kg)、 鼠曲草提取物中剂量组 (800 mg / kg)、 鼠曲 草提取物高剂量组 (1 600 mg / kg) 和双醋瑞因组 (54 mg / kg), 每组 15 只, 除假手术组外, 使用 ALCT 将 余下大鼠制成 OA 模型并给予相应药物干预, 连续干预 30 d。 HE 染色观察膝关节软骨组织病理损伤情况, 酶联免疫吸附法检测血清和膝关节灌洗液中炎性因子水平, 比色法检测膝关节灌洗液中氧化应激因子水平, Western 印迹检测膝关节组织中蛋白激酶受体 R 样内质网激酶/ 真核翻译起始因子 2a / CCAAT/ 增强子结合蛋 白同源蛋白 (PERK/ eIF2a / CHOP) 信号通路相关蛋白表达。 结果 假手术组有光滑、 完整的软骨表面, 模 型组和鼠曲草提取物低剂量组软骨组织破坏严重且关节软骨层状结构模糊、 细胞排列紊乱, 鼠曲草提取物 中、 高剂量组和双醋瑞因组病理损伤程度较模型组得到明显的缓解。 模型组大鼠 Mankin’s 评分和血清、 关 节灌洗液中的肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、 白介素-6 (IL-6)、 IL-1β 水平高于假手术组 (P< 0. 05), 关节灌 洗液中丙二醛 (MDA) 水平高于假手术组 (P< 0. 05), 关节灌洗液中超氧化物歧化酶 ( SOD)、 胱甘肽过 氧化物酶 (GSH-Px) 含量低于假手术组 (P< 0. 05), PERK、 eIF2a、 CHOP 蛋白表达高于假手术组 (P< 0. 05)。 鼠曲草提取物中、 高剂量组和双醋瑞因组 Mankin’s 评分和血清、 关节灌洗液中的 TNF-α、 IL-6、 IL-1β 水平低于模型组 (P< 0. 05), 关节灌洗液中 MDA 水平低于模型组 (P< 0. 05), 关节灌洗液中 SOD、 GSH-Px 含量高于模型组 (P< 0. 05), PERK、 eIF2a、 CHOP 蛋白表达低于模型组 (P< 0. 05)。 结论 鼠曲 草提取物适宜剂量可明显改善 OA 大鼠膝关节病理损伤和降低体内炎性反应、 氧化应激反应, 还可降低 PERK/ eIF2a / CHOP 信号通路活性。 

目的 探讨绞股蓝总皂苷 ( gypenosides, GP) 对骨关节炎大鼠的影响。 方法 将大鼠随机分为 假手术组、 模型组、 GP 低、 中、 高剂量组和双氯芬酸钠组。 HE 染色和阿利新蓝染色检测大鼠软骨病理损 伤; CT 检测大鼠 BV/ TV、 Tb. N、 Tb. Sp 和 Tb. Th; WB 检测软骨基质相关蛋白和软骨组织 SIRT1 / AMPK 相 关蛋白表达; ELISA 检测大鼠软骨组织和血清炎性因子和氧化应激。 结果 随着 GP 剂量增加, 大鼠骨组 织炎性浸润和纤维化明显改善; BV/ TV、 Tb. Th 和 Tb. N 明显上升, Tb. Sp 明显下降 (P< 0. 05); 软骨基质 SOX-9、 Aggrecan 和 Collagen Ⅱ水平明显上升 (P< 0. 05); 血清和软骨组织 TNF-α、 IL-6 和 IL-1β 水平明显 下降 (P< 0. 05); 软骨组织 SOD 和 GSH-Px 水平明显上升, MDA 水平明显下降 (P< 0. 05); 软骨细胞 pAMPK、 SITR1 和 PGC1α 蛋白表达明显增加 (P< 0. 05)。 结论 GP 激活 AMPK/ SITR1 表达, 减轻氧化应 激, 修复软骨损伤。

目的 研究注射用七叶皂苷钠 (sodium aescinate injection, SAI) 及效应成分混合物 SAK ( SA-A 和 SA-C 原 比 例 混 合) 的 体 外 抗 炎 作 用 及 机 制。 方 法 体 外 培 养 小 鼠 单 核 巨 噬 细 胞 白 血 病 细 胞 (RAW264. 7), 用脂多糖 ( lipopolysaccharides, LPS) 诱导体外炎症模型。 设正常对照组、 模型对照组及 SAI 和 SAK 给药组 (0. 4 ~ 40 μg / mL)。 以细胞活力、 NO 释放、 细胞内钙离子浓度、 ROS 水平和 iNOS、 COX-2 mRNA 表达等作为评价指标, 探讨 SAI 和 SAK 对各项指标的影响。 结果 LPS 可诱导 RAW264. 7 细 胞上清液中的 NO 释放, 使胞内的 Ca 2 + 浓度和 ROS 增加。 而 10 μg / mL 的 SAI 和 SAK 可显著抑制上述指标, 且 10 μg / mL 的 SAK 作用强于 SAI; 同时, SAI 和 SAK 对 LPS 诱导 RAW264. 7 细胞 iNOS、 COX-2 mRNA 的 表达上调具有抑制作用。 结论 SAI 和 SAK 均可以抑制 LPS 诱导的 RAW264. 7 细胞炎性反应, 其抗炎机制 与抑制 iNOS、 COX-2 mRNA 的表达有关, 且 SAK 与 SAI 比较, 其在去除 SA-B 和 SA-D 的毒性基础上抗炎活 性更强, 对于制药生产具有一定借鉴意义。

目的 研究转录因子 7 类似物 2 ( transcription factor 7-like 2, Tcf7l2) 对骨髓间充质干细胞 ( bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs) 成脂分化和 Wnt / β-catenin 信号通路的影响及其相关机制。 方 法 体外构建 Tcf7l2 低表达和过表达慢病毒, 并分别感染至成脂诱导的 BMSCs 细胞。 qRT-PCR 法测定 BMSCs 细胞中 Tcf7l2 的表达水平; 油红 O 法检测 BMSCs 细胞中脂肪含量; Western 印迹检测各组 BMSCs 细胞 中脂肪细胞分化相关蛋白和 Wnt / β-catenin 信号通路下游蛋白 β-catenin、 c-myc 和 cyclin D1 的相关蛋白表达 情况。 结果 与模型组和干扰阴性对照组比较, 干扰组 BMSCs 细胞中 Tcf7l2 mRNA 表达水平、 β-catenin、 c-myc 和 cyclin D1 表达水平降低 ( P < 0. 05), 脂肪颗粒数目、 PPAR-γ、 C/ EBP-α 表达水平升高 ( P < 0. 05); 与模型组和过表达阴性对照组比较, 过表达组 BMSCs 细胞中 Tcf7l2 mRNA 表达水平、 Wnt / β-catenin 信号通路相关蛋白 β-catenin、 c-myc 和 cyclin D1 表达水平升高 (P< 0. 05), 脂肪颗粒数目、 脂肪相关蛋 白 PPAR-γ、 C/ EBP-α 表达水平降低 (P< 0. 05)。 结论 Tcf7l2 过表达时能够抑制 BMSCs 细胞成脂分化, 可能与激活 Wnt / β-catenin 信号通路有关。

目的 探究细胞角蛋白 19 对甲状腺癌细胞生物学过程的影响及相关机制。 方法 将人甲状腺癌 细胞 (human thyroid cancer cells, B-CPAP) 作为研究对象, 使用不同浓度的角蛋白 19 处理细胞, 通过 MTT 实验、 细胞划痕实验和肿瘤细胞侵袭实验探究细胞角蛋白 19 对 B-CPAP 增殖、 侵袭及转移的影响。 最后通 过研究相关蛋白分析细胞角蛋白 19 对 B-CPAP 的作用机制。 结果 MTT 实验发现, 随着角蛋白 19 浓度升 高, 其对 B-CPAP 的增殖率也明显提高。 Transwell 实验发现, 与空白对照组比较, 角蛋白 19 处理后通过小 室的细胞数明显增加。 细胞划痕实验发现, 角蛋白 19 能够促进 B-CPAP 的迁移能力, 并且 B-CPAP 的迁移 能力与角蛋白 19 浓度呈正相关。 此外, 角蛋白 19 的这一作用与 PTEN 和 MAPK 通路有关。 结论 细胞角 蛋白 19 能够明显提高 B-CPAP 增殖、 侵袭以及转移的能力, 同时角蛋白 19 的这一作用与 PTEN 和 MAPK 通 路有关。

目的 探究薯蓣皂苷元对口腔鳞癌 HSC4 细胞生物学行为的影响。 方法 将 HSC4 细胞分为薯蓣 皂苷元 0、 0. 5、 1、 2 μmol / L 4 组, CCK-8、 5-溴-2′-脱氧尿苷 (BrdU) 染色、 克隆形成实验、 流式细胞术、 划痕实验和 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 凋亡、 迁移和侵袭, 免疫印迹检测 Bcl-2、 Bax 和 cleaced caspase-3 蛋白表达水平; JC-1 检测线粒体膜电位; H2DCFDA 检测活性氧 (ROS) 产生; 试剂盒检测谷胱 甘肽 (GSH) 和丙二醛 (MDA) 水平。 结果 与薯蓣皂苷元 0 μmol / L 组比较, 薯蓣皂苷元 1 μmol / L 组和 2 μmol / L 组细胞活力、 集落形成能力、 BrdU 阳性细胞率、 迁移和侵袭能力、 线粒体膜电位降低, 细胞凋亡 率升高, Bax 和 cleaced caspase-3 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调, ROS 和 MDA 水平升高, GSH 水平降 低。 结论 薯蓣皂苷元可抑制 HSC4 细胞的增殖和运动能力, 通过线粒体途径和 ROS 的产生诱导细胞凋亡。 

目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术 ( rifampicin resistant real-time fluorescent quantitative nucleic acid amplification, GeneXpert MTB/ RIF) 联合基因芯片技术在涂阴结核分支杆菌 (Mycobacterium tuberculosis, MTB) 诊断中的价值及血清可溶性髓系细胞触发受体-1 ( serum soluble triggering receptor-1, sTREM-1)、 降钙素原 (procalcitonin, PCT) 水平的意义。 方法 选取 2019 年 1 月至 2021 年 1 月在聊城市 人民医院就诊的疑似涂阴肺结核患者130 例, 采集肺泡灌洗液, 给予 GeneXpert MTB/ RIF、 基因芯片及药敏 试验检查, 同时检查肺结核患者血清 sTREM-1、 PCT 水平。 以肺泡灌洗液结核菌培养及药敏试验为金标准 评价 GeneXpert MTB/ RIF 联合基因芯片检测对涂阴肺结核的诊断价值。 采用 ROC 评价血清 sTREM-1、 PCT 对涂阴肺结核的诊断价值。 结果 以肺泡灌洗液结核菌培养诊断出非涂阴肺结核患者 58 例, 涂阴肺结核患 者 72 例。 GeneXpert MTB/ RIF 联合基因芯片诊断肺结核的灵敏性为 68. 06 % , 高于基因芯片单独诊断 (P< 0. 05), GeneXpert MTB/ RIF 联合基因芯片诊断肺结核的特异性、 准确性、 阳性预测值和阴性预测值分别为 91. 38 % 、 78. 46 % 、 90. 74 % 和 69. 74 % , 与 GeneXpert MTB/ RIF 诊断、 基因芯片单独诊断比较差异无统 计学意义 (P> 0. 05); GeneXpert MTB/ RIF 联合基因芯片诊断 MDR-TB 的灵敏性、 特异性、 准确性、 阳性 预测值和阴性预测值分别为 94. 12 % 、 85. 45 % 、 87. 50 % 、 66. 67 % 和 97. 92 % , 与 GeneXpert MTB/ RIF 诊断基因芯片单独诊断比较差异无统计学意义 (P> 0. 05); 重症肺结核患者血清 sTREM-1、 PCT 分别为 (18. 04 ± 2. 07) ng / ml 和 (2. 09 ± 0. 19) ng / ml, 明显高于轻症肺结核患者 ( P< 0. 05); 血清 sTREM-1、 PCT 预测重症肺结核的 ROC 曲线下面积分别为 0. 811 和 0. 844, 截断值分别为 16. 32 ng / ml 和 2. 00 ng / ml, 灵敏性分别为 89. 30 % 和 82. 00 % , 特异性分别为 61. 40 % 和 79. 60 % 。 结论 GeneXpert 联合基因芯片技 术可提高涂阴 MTB 诊断灵敏性, 且两种手段对 MDR-TB 均有较好的诊断价值。 重症肺结核患者 sTREM-1、 PCT 水平明显高于轻症肺结核, 血清 sTREM-1、 PCT 对重症肺结核诊断灵敏性、 特异性较高, 可作为早期 诊断的手段加以应用。

目的 研究精氨酸调节蛋白 ArgR 对铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa, PA) 中Ⅵ型分泌系 统 (type Ⅵ secretion system, T6SS) 相关基因表达的调节作用。 方法 构建带有 SUMO 标签的 ArgR 蛋白表 达载体, 利用大肠埃希菌 DH5α 异源表达铜绿假单胞菌 ArgR 蛋白。 采用凝胶电泳迁移 ( electrophoretic mobility shift assay, EMSA) 实验探究 ArgR 与 T6SS 相关基因 hsiA2 启动子的相互作用; 构建带有 Flag 标签 的 Hcp2-Flag 表达载体, 利用蛋白质免疫印迹实验和 qRT-PCR 技术检测 argR 基因对 T6SS 结构基因 hcp2 的 调控。 结果 通过酶切去标签, 得到可溶性的 ArgR 蛋白; EMSA 结果显示 ArgR 和 hsiA2 启动子有结合。 Western 印迹和 qRT-PCR 实验结果表明在 argR 缺失的突变体中 hcp2 的表达量明显升高, 回补 argR 后, hcp2 的表达量可以补回至野生型的水平。 结论 研究表明 ArgR 能结合 hsiA2 启动子并负调控 T6SS 相关基因的 表达。

糖尿病血管病变是糖尿病致残、 致死的主要原因, 然而目前多种治疗策略对糖尿病血管病变的 防治仍未取得理想的结果。 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 (mechanistic target of rapamycin kinase, mTOR) 是一 种存在于真核生物中的丝氨酸/ 苏氨酸蛋白激酶, 在多种生物过程中发挥着重要作用。 研究发现 mTOR 可 通过调节细胞增殖、 凋亡、 自噬、 氧化应激及炎性反应等路径参与糖尿病血管病变的发生发展。 文章就 mTOR 对糖尿病相关动脉粥样硬化、 糖尿病肾病及糖尿病视网膜病变中的影响及相关机制进行综述, 为糖 尿病血管病变的防治提供新策略。 

长链脂酰辅酶 A 合成酶系 (acyl-CoA synthetase long chain family, ACSLs) 催化辅酶 A (CoA) 与 12 ~ 20 个碳链长度的长链脂肪酸连接, 参与脂质的合成和代谢过程。 ACSL5 是唯一一种既位于线粒体上又 参与肠上皮细胞凋亡的 ACSLs 亚型, 在多种组织中都有表达。 已有许多关于不同癌症的研究报道 ACSL5 在 其中的表达明显不同于健康个体, 且 ACSL5 高表达对肺癌、 胰腺癌、 乳腺癌和卵巢癌患者的预后有积极影 响。 通过研究 ACSL5 参与的脂质代谢在癌症中的作用, 为靶向脂质代谢酶的癌症治疗提供新的靶点和策 略。

肾细胞癌 (renal cell carcinoma, RCC) 深刻且广泛地影响全人类, 肾透明细胞癌 ( clear cell renal cell carcinoma, ccRCC) 是其最主要病理亚型。 在过去 30 年, 肾细胞癌的生物分子机制被不断挖掘, 随 着 DNA 修复途径及相关基因研究深入, 逐渐发现了他们之间的联系。 细胞总是暴露在各种损伤因素下, 导 致基因组损伤, 若 DNA 修复系统功能缺陷, 导致基因组不稳定, 最终细胞凋亡或转变为癌细胞。 DNA 修 复基因 (DNA repair gene, DRG) 与 ccRCC 在易感性, 预后及治疗方面具有显著的生物学相关性, 为进一 步探索 ccRCC 与 DNA 损伤修复之间的分子机制, 确定 ccRCC 新的分子标志物, 寻找合适免疫抑制物治疗 靶点奠定了一定的基础。