摘要： 目的 探讨党参、 黄精和三七等中药提取物对超氧化物歧化酶 ( superoxide dismutase, SOD) 基因启动子活性的影响。 方法 使用乙醇超声萃取和旋转蒸发的方法从党参、 黄精和三七等中药中制备醇提物; 然后从人胚肾 293T (HEK-293T) 细胞基因组 DNA 中扩增 SOD 基因启动子 DNA 片段并连接入启动子报告质粒 pGL3-Basic 中, 通过荧光素酶活性检测成功构建 pGL3-SOD 启动子报告质粒; 细胞活力测定(MTS 法) 确定了中药提取物的使用浓度后, 将 pGL3-SOD 启动子报告质粒转染 HEK-293T 细胞, 然后加入党参、 黄精和三七等中药提取物, 并通过检测荧光素酶活性来测定这些中药提取物对 SOD 基因启动子活性的影响。 结果 PCR 扩增出 1 500 bp SOD 基因启动子片段, 大小与文献和 GenBank 数据库报道一致, 成功构建 pGL3-SOD 启动子报告质粒; 与转染空载体 pGL3-Basic 相比, 转染 pGL3-SOD 启动子报告质粒的 HEK-293T 细胞的荧光素酶活性增强了 72 倍; 党参、 黄精和三七中药提取物在 50 ~ 400 μg / mL 时对 HEK-293T 细胞的活力影响不明显, 400 μg / mL 的党参、 黄精和三七提取物增强 SOD 基因启动子活性分别为 1. 79、 1. 72和 1. 57 倍。 结论 成功构建 pGL3-SOD 启动子报告质粒并具有启动荧光素酶活性; 党参、 黄精和三七增强SOD 的活性可能是通过增强其基因的启动子活性水平来实现。
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