医学分子生物学杂志 ›› 2022, Vol. 19 ›› Issue (2): 97-104.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2022.02.001
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摘要: 目的 探讨抑制蛋白磷酸酶 4 ( protein phosphatase 4, PP4) 活性对肝细胞脂性凋亡的影响。 方 法 以 400 μmol / L 的棕榈酸 (palmitic acid, PA) 处理 HepG2 细胞 24 h 建立肝细胞脂性凋亡模型; 以西方 饮食喂养 C57BL/ 6J 小鼠 16w 建立非酒精性脂肪肝炎 (non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 模型; 构建磷酸 酶活性缺失的显性负性突变体 AD-PP4RL 腺病毒载体; 转染 AD-PP4RL 至 HepG2 细胞腺病毒以抑制肝细胞 中 PP4 的活性; 尾静脉注射 AD-PP4RL 以抑制肝脏中 PP4 的活性; 转染 RAC1 慢病毒至 HepG2 细胞中抑制 RAC1 的表达; BoDIPY 染色检测细胞及组织中脂质蓄积情况; TUNEL 染色检测细胞凋亡水平; 免疫沉淀结 合丝苏氨基酸磷酸酶活性检测法测定 PP4 活力; GTP 酶活性检测试剂盒检测 RAC1 活性; Western 印迹检测 脂质代谢及脂性凋亡相关蛋白的表达水平。 结果 ① 在 PA 处理的 HepG2 细胞及西方饮食喂养诱导的 NASH 小鼠肝脏中 PP4 活性升高; ② 过表达磷酸酶活性缺失突变的腺病毒载体 AD-PP4RL 能有效抑制 PP4 活性; ③ 抑制 PP4 活性降低 PA 诱导的 HepG2 细胞及 NASH 小鼠肝脏中脂性凋亡水平, 下调脂性凋亡相关 基因 PUMA、 Bim 及 c-caspase3 的水平; ④ RAC1 介导了在 PP4 在肝细胞脂性凋亡中的作用。 结论 抑制 PP4 活性可以通过抑制 RAC1 介导的 JNK 信号通路的激活, 改善肝细胞脂性凋亡。
中图分类号: