目的 制备融合 IL2 的慢病毒以提高对人原代 T 淋巴细胞的转导效率。 方法 将白细胞介素-2 (IL2) 基因定向克隆至水疱性口炎病毒 G 蛋白 (VSV-G) 编码基因 5′端, 构建新型慢病毒包装辅助质粒 pMD2.IL2-G。 使用不同剂量 pMD2.IL2-G 进行慢病毒包装, 应用免疫印迹和 ELISA 比较病毒滴度, 流式细胞 术检测病毒对 T 细胞的转导效率。 结果 单独使用 pMD2.IL2-G 显著降低病毒得率。 与传统慢病毒相比, pMD2.IL2-G 与原始辅助质粒 pMD2.G 以 1∶4 混合制备的慢病毒, 能够显著提高 EGFP 基因导入 T 细胞的效率 (89. 2 % vs. 40. 2 % ), 且病毒得率相当。 结论 融合 IL2 的慢病毒能够对 T 细胞进行高效的基因转导, 为 基因修饰 T 细胞的临床应用提供有力支持。

目的 探讨 K562 细胞分化前后全基因组上的 PU. 1 结合位点图谱及靶基因。 方法 用 hemin 对 K562 细胞诱导分化 72 h, 诱导分化前后的细胞利用 PU. 1 抗体进行染色质免疫共沉淀实验, 并进行高通量 测序, 利用生物信息学分析 K562 细胞分化前后 PU. 1 在基因组上的结合位点, 并进行基因注释、 基因功能 分析、 KEGG 通路分析及靶基因预测。 结果 发现 K562 细胞分化前 PU. 1 结合位点有 3 107 个, 分化后的 结合位点有 1 897 个, 共有的结合位点有 843 个。 KEGG 通路分析结果显示, 分化后 PU. 1 结合位点特有的 信号通路有 NF-κB 信号通路, 生长激素合成、 分泌和运输通路, MAPK 信号通路。 K562 细胞分化前后有 1 210个差异的 PU. 1 结合位点, 对应 179 个靶基因, 其中分化相关的 PU. 1 靶基因包括球蛋白基因、 自噬相 关基因、 microRNA、 非编码 RNA 以及转录因子。 Motif 分析结果显示, PU. 1 倾向于去结合 ACTTCC 特定序 列。 结论 PU. 1 的基因组结合位点在 K562 细胞分化前后发生了显著变化, 此研究结果为进一步揭示 PU. 1 在血细胞中的功能及作用机制提供了依据。 

目的 研究核仁小核糖核蛋白 RRP9 的蛋白降解机制。 方法 组织表达谱分析 RRP9 在小鼠和人 类正常组织中的种属特异性和在不同组织中的特异性表达, 并分析 RRP9 在人的正常结直肠组织和结直肠 癌组织中的表达差异; 使用放线菌酮 (cycloheximide, CHX) 抑制结直肠癌细胞蛋白合成来检测 RRP9 蛋白 半衰期; 抑制自噬-溶酶体途径后检测 RRP9 蛋白含量变化以明确自噬-溶酶体途径对 RRP9 蛋白水平的影 响; 最后通过免疫荧光和免疫共沉淀检测 LC3b 与 RRP9 之间的相互作用。 结果 RRP9 为长寿命蛋白; 抑 制自噬-溶酶体途径使 RRP9 蛋白水平升高; RRP9 与 LC3b 之间存在相互作用。 结论 自噬-溶酶体途径调 控 RRP9 蛋白的降解。

目的 探讨长链非编码 RNA (lncRNA) -H19 对甲状腺癌细胞增殖、 侵袭和细胞周期的影响。 方 法 检测 lncRNA-H19 在癌组织、 癌旁组织、 正常人甲状腺上皮细胞 TEC 及甲状腺癌细胞 KAT18、 FTC133、 BCPAP、 TPC-1 中的表达; 检测沉默 lncRNA-H19 对细胞增殖、 侵袭和细胞周期的影响。 结果 lncRNA-H19 在甲状腺癌组织和细胞系中高表达; 不同肿瘤大小、 N 分期、 TNM 分期患者的 lncRNA-H19 表达水平差异 显著 (P< 0. 05)。 沉默 lncRNA-H19 后, 48、 72 h 的细胞增殖率及克隆形成率、 穿膜细胞数、 微血管形成 数量均明显下降 (P< 0. 05); Ki67、 PCNA、 N-cadherin、 Fibronectin、 VEGF、 MMP-9、 MMP-14、 cyclin A、 CDK2、 CDK4、 cyclin D1 蛋白表达明显下调 (P< 0. 05), 而 E-cadherin 蛋白表达明显上调 (P< 0. 05)。 结 论 沉默 lncRNA-H19 可能通过调节周期相关蛋白表达调节 FTC133 细胞增殖、 侵袭及细胞周期。 

目的 探究利多卡因体外下调 ATP 结合转运蛋白 G 家族成员 2 (ATP binding cassette transporter G family member 2, ABCG2) 抑制人乳腺癌细胞的活性及顺铂耐药性的可能机制。 方法 选取 MDA-MB-231、 MCF-7 细胞, 使用 CCK-8、 EdU、 TUNEL 法染色验证利多卡因对细胞增殖活性、 顺铂干预增敏作用, RT-PCR 和 Western 印迹法检测利多卡因对 ABCG2 以及凋亡蛋白、 耐药蛋白表达及 PI3K/ Akt 蛋白磷酸化的影 响; CCK-8 法、 TUNEL 法验证过表达 ABCG2 对利多卡因联合顺铂干预乳腺癌细胞系增殖活性、 凋亡率。 结果 0. 5 mmol / L 干预时乳细胞存活率及 EdU 阳性细胞数显著降低 (P< 0. 05); 与对照组相比, 利多卡因 组和顺铂组细胞存活率、 Bcl-2 表达显著降低, 细胞凋亡率、 Cleaved-PARP、 Cleaved-caspase-3、 Bax 表达量 显著升高, 联合处理后变化更显著 (P< 0. 05); 利多卡因处理后, 癌细胞系中 ABCG2 mRNA 及蛋白表达水 平降低 (P< 0. 05); 与对照组比较, 顺铂 + 利多卡因组 ABCG2、 P-gp、 MRP1、 MRP2 蛋白表达显著降低 (P <0. 05); 与顺铂组比较, 利多卡因组细胞存活率、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 表达显著降低 (P< 0. 05), 细胞凋亡率显著升高 (P< 0. 05); 与空质粒组比较, ABCG2 过表达组细胞存活率、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 表达显著升高 (P< 0. 05), 细胞凋亡率显著降低 (P< 0. 05)。 结论 利多卡因可能通过抑制 ABCG2 表达及 PI3K/ AKT 信号通路的激活抑制乳腺癌细胞增殖活性及提高对顺铂敏感性。

目的 探索 c-Ski 蛋白在人冠状动脉内皮细胞内皮间充质转化过程中的表达特征及其调控 p38 信 号通路的机制, 为心肌纤维化提供新的预防和治疗的靶点。 方法 以人冠状动脉内皮细胞 ( human coronary artery endothelial cells, HCAECs) 为研究对象, 采用转化生长因子 β1 (transforming growth factor-beta1, TGFβ1) 诱导构建内皮细胞间充质转化模型, 利用实时荧光定量 PCR ( quantitative real-time PCR, Q-PCR)、 蛋 白免疫印迹法检测 c-Ski 和内皮间充质转化相关标志物的表达。 结果 Q-PCR 和 Western 印迹实验结果显 示, c-Ski 表达水平随着 TGF-β1 诱导浓度的增高而显著降低 (P< 0. 05)。 过表达 c-Ski 后, TGF-β1 诱导的 vimentin、 α-SMA 的表达降低, CD31 的表达升高, 表明 TGF-β1 诱导的 HCAECs 细胞内皮间充质转化被抑 制。 p38 选择性抑制剂 SB203580 处理后, HCAECs 细胞内皮间充质转化程度进一步加深; c-Ski 过表达后, p38 通路被激活; p38 选择性抑制剂 SB203580 可一定程度回复 c-Ski 过表达对 TGF-β1 诱导的 HCAECs 细胞 内皮间充质转化的抑制作用 (P< 0. 05)。 结论 c-Ski 可通过调控 p38 信号通路抑制 TGF-β1 介导人冠状动 脉内皮细胞内皮间充质转化。 

目的 结合 ABO 血型血清学结果, 采用 ABO 基因测序技术鉴定 CisAB 血型。 探讨 CisAB/ B 亚型 的血清学和基因型的关系。 方法 对于送至青岛市中心血站 ABO 血型待定的献血者标本, 采用经典试管法 进行血清学分析。 采用聚合酶链反应 (PCR) 直接测序的方法分析 ABO 基因第 6, 7 外显子及侧翼序列、 启动子和增强子序列。 对于有突变的标本再进行单倍型测序确认。 结果 此试验中 CisAB/ B 亚型个体的基 因型为 CisAB01 / B101。 血清学表型分别为 A2B 型和 AxB 型。 这两例标本的启动子序列和增强子序列相同。 结论 依据血清学结果往往很难确定 CisAB 血型, 基因测序技术结合血清学分析能够准确鉴定血型。 基因 型相同的个体会表现出不同的血清学特点。

目的 目前, 中国新冠疫情虽已基本控制, 但仍需对新冠病毒进行大规模检测。 因而需建立或 改进能够特异灵敏大规模地检测新冠病毒的方法, 进一步提高新冠病毒检测的灵敏度和准确性。 方法 研 究设计巢式 PCR 偶联 qRT-PCR 的检测方法用以克服多人份样本混合稀释所造成的病毒拷贝数过低导致的 检测不准确。 首先, 通过外引物 PCR 大幅提高被检测样本的拷贝数, 再在此基础上通过荧光定量 PCR 检测 由国家疾控中心 (CDC) 推荐的 N 基因序列。 结果 在降低其检测假阳性率的同时, 最终可以将检测灵敏 度在原来的基础上提高了 3 个数量级, 稳定地检测到单个拷贝的病毒模板。 结论 此研究可大幅度提高新 冠病毒检测的灵敏度, 为大规模多人份样本混合检测提供可行的方法。

目的 分析角蛋白 17 (Keratin 17, KRT17) 在结直肠癌 ( colorectal cancer, CRC) 中的表达及 其临床预后价值。 方法 采用生物信息学方法分析 KRT17 在 CRC 数据库中的表达及预后价值; 进一步, 采用免疫组织化学技术检测 KRT17 蛋白在 95 对 CRC 临床样本组织中的表达水平, 并分析其表达与患者临 床病理特征及预后的相关性。 结果 生物信息分析发现, KRT17 在 CRC 组织中的表达水平显著高于正常组 织, 其表达与肿瘤病理类型、 淋巴结转移及 TNM 分期相关, 并预示较差的总生存期 (P均 < 0. 05)。 免疫组 化验证显示, 与癌旁组织相比, 蛋白在 CRC 组织中的表达显著上调 (t = 45. 704, P< 0. 001), 与生物信息 学分析结果保持一致; KRT17 高表达与肿瘤分化程度、 浸润深度、 淋巴结转移、 TNM 分期、 淋巴脉管浸润 及神经侵犯显著相关 (P均 < 0. 05)。生存分析显示, KRT17 高表达组 CRC 患者的总生存期显著低于低表达组 (χ 2 = 8. 510, P = 0. 004); 进一步的单因素和多因素分析结果表明, KRT17 高表达是影响 CRC 患者总生存期 的一个独立危险因素 (HR = 2. 015, 95 % CI: 1. 219 ~ 4. 457, P = 0. 018)。 结论 KRT17 在 CRC 组织中表达 显著上调, 且其高表达预示着肿瘤进展及不良预后, 有望成为 CRC 患者预后评估的生物标志物。 

目的 探究驱动蛋白超家族 18B (KIF18B) 对胃癌细胞增殖、 迁移的影响及潜在调控机制。 方 法 采用 qRT-PCR 和 Western 印迹分析胃癌组织和细胞 (MKN-28、 AGS、 HGC-27) 中 KIF18B 的表达水 平; 通过 CCK-8、 克隆形成以及划痕实验检测胃癌细胞的增殖、 迁移情况; Western 印迹法检测迁移蛋白 (E-cadherin、 N-cadherin) 和 MMP-3 的表达。 结果 KIF18B 在胃癌组织和细胞中表达上调; 干扰 KIF18B 显著抑制 AGS 细胞增殖、 集落形成和细胞迁移, 提高 E-cadherin 的蛋白表达, 同时降低 N-cadherin 和 MMP-3 的蛋白表达; 此外, 干扰 KIF18B 能显著抑制 CDCA8 并促进 p53 的蛋白表达, 过表达 CDCA8 能逆转 KIF18B 干扰对细胞增殖、 迁移的影响。 结论 KIF18B 通过调控 CDCA8 / p53 信号通路影响胃癌细胞的增殖、 迁移。 

目的 研究地菍总黄酮对糖尿病肾病 (diabetic nephropathy, DN) 大鼠胰岛素抵抗和肾损害的影 响。 方法 在 60 只大鼠中随机选取 10 只为正常组, 剩余 50 只均经腹腔注射链脲佐菌素 STZ 建立 DN 模 型, 共建模成功 43 只, 选取 40 只 DN 大鼠随机均分为 4 组每组各 10 只, 分别为模型组以及地菍总黄酮低 剂量组 150 mg / (kg·d)、 中剂量组 300 mg / (kg·d) 和高剂量组 600 mg / (kg·d), DN 大鼠模型建立后 第 2 天起按计量给予地菍总黄酮灌胃, 正常组和模型组给予相同体积生理盐水, 5 组均连续干预 30 d, 然 后取肾组织进行病理分析, 同时检测空腹血糖 ( FPG)、 空腹胰岛素 ( FINS)、 血肌酐 ( Scr)、 尿素氮 (BUN)、 尿酸 (UA) 和微量白蛋白 (mAlb) 等实验室指标, 计算胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR) 和敏感指 数 (ISI)。 结果 DN 组给药前 FPG、 FINS、 Scr、 BUN、 UA 和 mAlb 水平均高于正常组, 差异有统计学意 义 (P< 0. 05); DN 大鼠 FPG、 FINS 和 HOMA-IR 给予地菍总黄酮干预后与模型组相比均明显降低 (P< 0. 05), ISI 均明显升高 ( P < 0. 05), 且 HOMA-IR 和 ISI 变化幅度随着用药剂量增加而明显增大 ( P < 0. 05); DN 大鼠给予地菍总黄酮干预后 Scr、 BUN、 UA 和 mAlb 与模型组相比均明显降低 (P< 0. 05), 且 随着用药剂量增加呈明显下降趋势 (P< 0. 05)。 结论 地菍总黄酮用于 DN 大鼠模型干预可有效改善胰岛 素抵抗, 降低血糖水平, 减轻肾组织病理损伤并促进肾功能恢复。

目的 探讨热毒宁注射液对肺炎克雷伯菌诱导的幼龄小鼠肺功能损伤和免疫紊乱调节的影响。 方法 将小鼠随机分为 5 组: 对照组、 模型组、 热毒宁注射液低中高剂量组。 HE 染色检测肺组织病理情 况。 肺组织病理学评分和 W/ D 值评估肺损伤。 RT-PCR 检测 Ki67、 Survivin mRNA 表达。 Westernt 印迹检测 Caspase-3、 Caspase-9、 TGF-β 和 α-SMA 蛋白表达。 Masson 染色检测肺组织纤维化。 ELISA 检测肺组织和外 周血中 iNOS、 IL-10 含量。 结果 与模型组比较, 热毒宁注射液中高剂量组的肺损伤和肺纤维化明显改善, 肺组织病理学评分和 W/ D 值降低 (P< 0. 05), Ki67 和 Survivin mRNA 表达升高 (P< 0. 05), Caspase-3、 Caspase-9、 TGF-β 和 α-SMA 蛋白表达降低 (P< 0. 05), 组织和外周血中的 iNOS 含量降低 (P< 0. 05), IL-10 含量升高 (P< 0. 05)。 结论 热毒宁注射液可改善肺炎克雷伯菌所致幼龄小鼠的肺功能损伤和免疫紊 乱。

脓毒症是世界范围内重症监护病房常见的死亡原因。 由于这种免疫综合征的复杂性, 迫切需要 开发新的治疗策略。 水通道蛋白 ( aquaporins, AQPs) 参与脓毒症的多种生理功能, 其表达受到不同程度 的调控。 药物靶点或生物标记物可能存在水通道蛋白 (AQPs) 上, 因为它们是调节脓毒症的关键。 对水通 道蛋白调节机制的进一步研究可能确定潜在的治疗靶点。

在皮瓣移植术后常常会发生缺血再灌注损伤, 缺血再灌注损伤是引起皮瓣部分或全部坏死的重 要原因。 目前对皮瓣缺血再灌注损伤的发病机制尚不清楚, 大多数学者认为可能与细胞凋亡、 炎性反应、 组织微循环障碍、 细胞氧化损伤等有关。 学者们提出用缺血预处理, 药物干预, 减少炎性反应, 移植干细 胞或干细胞联合基因疗法, 体外冲击波, 抗氧化反应和抑制细胞凋亡等方法减轻皮瓣缺血再灌注损伤。 文 章对近年来治疗皮瓣缺血再灌注损伤的实验研究及临床应用现状进行综述, 旨在为皮瓣缺血再灌注损伤的 治疗提供理论依据和新的思路。

Treacher Collins 综合征 (Treacher Collins syndrome, TCS; OMIM number 154500), 是一种以常染 色体显性遗传为主的先天颅面畸形疾病, 其发病机制复杂。 细胞质核糖体生物发生因子 1 ( treacle ribosome biogenesis factor 1, TCOF1) 是其最初的致病基因。 文章结合了近年来的研究论文, 介绍 TCOF1 编码的蛋白 Treacle 的结构功能及 TCOF1 基因在 TCS 中的突变情况, 罗列了 TCOF1 介导 TCS 的发生发展的信号通路。 并且详细介绍了 TCOF1 调控端粒复制、 DNA 损伤应答 (DNA damage response, DDR) 的过程以及 TCOF1 和 p53 之间的关系。 最后围绕 TCOF1 对 TCS 及相关疾病的治疗提出了展望。