目的 分析miR-133a-3p及其潜在靶点转化生长因子-β诱导因子2(transcription growth factor-β-induced factor 2,TGIF2)在急性髓系白血病细胞系OCI-AML3细胞增殖、凋亡及线粒体功能中的作用机制。方法 OCI-AML3细胞分别或共转染miR-133a-3p mimic和pcDNA-TGIF2。RT-qPCR检测转染效率;生物信息学软件预测miR-133a-3p和TGIF2靶向位点;利用双荧光素酶报告系统确认二者靶向关系;CCK-8实验和EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡水平与线粒体膜电位;试剂盒检测ROS含量;蛋白质印迹检测Caspase-3、Caspase-9、TGIF2、Bcl-2、Bax及c-Myc蛋白的表达。结果 在OCI-AML3细胞中,miR-133a-3p与TGIF2的表达呈负相关,miR-133a-3p靶向结合TGIF2。与对照组比较,TGIF2组的细胞活力显著升高(P<0.05);EdU阳性细胞明显增多;细胞凋亡率显著降低(P<0.05);Bax/Bcl-2、Caspase-3及Caspase-9表达显著下调(P<0.05),而c-Myc表达显著上调(P<0.05);线粒体膜电位无明显变化;ROS含量显著降低(P<0.05)。miR-133a-3p过表达逆转了上述结果。与TGIF2组比较,mimic+TGIF2组的细胞活力显著降低(P<0.05);EdU阳性细胞明显减少;细胞凋亡率显著升高(P<0.05);Bax/Bcl-2、Caspase-3及Caspase-9表达显著上调(P<0.05),而c-Myc表达显著下调(P<0.05);线粒体膜电位明显改变;ROS含量显著升高(P<0.05)。结论 miR-133a-3p通过靶向TGIF2抑制OCI-AML3细胞活力及增殖,上调ROS水平,诱导线粒体膜电位去极化,促进细胞凋亡。

目的 探讨miR-370-3p靶向调控STAT3对肝癌HepG2细胞转移能力的影响。方法 将miR-NC或miR-370-3p mimic和pcDNA或pcDNA-STAT3分别转染到HepG2细胞,并检测miR-370-3p和STAT3 mRNA相对表达量。miR-370-3p mimic与STAT3-wild type(wt)或STAT3-mutant(mut)共转染HepG2细胞,最终建立对照组,miR-370-3p组,STAT3组和miR-370-3p+STAT3组。Transwell试验、划痕试验检测肿瘤细胞侵袭、迁移能力。蛋白质印迹检测上皮间质转化。建立原位异种移植肿瘤小鼠模型,分别为miR-NC转染组和miR-370-3p转染组。结果 与对照组比较,miR-370-3p mimic组miR-370-3p mRNA相对表达量显著上调。pcDNA-STAT3组STAT3 mRNA相对表达量显著上调。miR-370-3p的过表达能抑制肝癌HepG2细胞侵袭、迁移并影响上皮间质转化相关蛋白的表达。同时miR-370-3p能靶向STAT3抑制肝癌HepG2细胞上述转移能力。在体内试验中miR-370-3p过表达能抑制肿瘤生长。结论 miR-370-3p能靶向STAT3抑制肝癌HepG2细胞侵袭、迁移。

目的 探讨透明形成素相关蛋白1(diaphanous-related formin 1,Diaph1)在肾病模型小鼠肾脏中的关键作用。方法 野生型(WT)、杂合型(Diaph1^+/-)及纯合型(Diaph1^-/-)小鼠分别构建对照组、阿霉素模型组,每组7只。阿霉素模型组使用尾静脉注射阿霉素诱导,对照组给予等体积生理盐水注射。利用CRISPR/Cas9技术对小鼠Diaph1基因全身敲除,再通过杂合小鼠交配繁育出纯合小鼠,PCR进行基因型鉴定;HE染色观察各组小鼠肾脏形态,免疫荧光染色观察Diaph1在肾小球及周围肾小管的表达;微量酶标仪法和肌氨酸氧化酶法分别检测小鼠血清及尿液中白蛋白与肌酐;蛋白质印迹检测小鼠肾皮质Diaph1蛋白表达;实时荧光定量PCR检测小鼠足蛋白(Podocin)、CD2相关蛋白(CD2-associated protein,Cd2ap)、肾病蛋白(Nephrin)及肾足突裂孔膜蛋白1(kin of IRRE-like protein 1,Neph1)的mRNA表达。结果 在野生型小鼠中,与对照组相比,阿霉素模型组小鼠体质量下降(P<0.05)、肾小囊囊腔变窄,生化指标检测发现尿白蛋白相对含量升高(P<0.05)、血肌酐含量升高(P<0.05),而尿肌酐含量下降(P<0.05);基因表达水平检测发现Diaph1基因mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。在Diaph1敲除小鼠中,与阿霉素处理后的WT小鼠相比,阿霉素处理后的杂合(Diaph1^+/-)及纯合(Diaph1^-/-)小鼠肾小球硬化程度均加重、肾小球囊腔均变窄;基因表达水平检测发现,阿霉素处理后的纯合(Diaph1^-/-)小鼠肾脏中Podocin、Cd2ap和Nephrin的表达均有所降低(P<0.05),同时生化指标检测发现血清白蛋白和血肌酐含量降低(P<0.05)。结论 Diaph1基因在肾脏足细胞及肾小管上皮细胞中发挥重要的保护作用,表明Diaph1是阿霉素肾病模型中潜在功能基因,为肾病综合征的治疗以及未来研究提供了新的思路和方向。

目的 探讨小分子干扰RNA(siRNA)靶向干扰缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对胃癌(gastric cancer,GC)MGC-803细胞增殖、凋亡及细胞程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达的影响。方法 收集35例GC患者的癌及癌旁组织,检测HIF-1α和PD-L1 mRNA表达及相关性。检测不同GC细胞系中HIF-1α mRNA表达,筛选MGC-803细胞进行后续实验。将MGC-803细胞分为正常组、缺氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-HIF-1α组、缺氧+si-HIF-1α+pcDNA组、缺氧+si-HIF-1α+pcDNA-PD-L1组,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达;建立裸鼠移植瘤模型验证体内作用。结果 与癌旁正常组织比较,GC组织中HIF-1α和PD-L1 mRNA表达升高且呈正相关(P<0.05);HIF-1α mRNA和蛋白表达水平在MKN-45、SGC-7901、AGS、HGC-27、MGC-803中较GES-1细胞高(P<0.05),其中MGC-803表达水平最高。沉默HIF-1α可下调缺氧环境下MGC-803细胞中PD-L1表达,降低增殖活性以及PCNA、Bcl-2表达,升高凋亡率以及Bax、Cleaved-Caspase-3表达(P<0.05);沉默HIF-1α可降低裸鼠移植瘤体积、质量及PD-L1阳性表达(P<0.05);过表达PD-L1可逆转上述作用。结论 敲低缺氧环境下HIF-1α表达可下调PD-L1表达,并抑制GC细胞增殖,促进凋亡。

目的 探究miR-429对慢性难愈合创面修复及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 将60大鼠随机分为空白对照组、模型组、阴性对照组(注射antagomir NC)、LV-429组(注射miR-429 antagomir慢病毒)和抑制剂组(注射miR-429 antagomir慢病毒+Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWP-2)。统计大鼠创面愈合率,取创面组织检测miR-429水平,Wnt3a和β-catenin蛋白表达量,血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA),内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,ENOS)表达情况。取大鼠血清检测白介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。结果 与模型组和阴性对照组比较,LV-429组和抑制剂组miR-429表达下降。与模型组和阴性对照组比较,LV-429组换药第3、6、12天时创面愈合率,Wnt3a、β-catenin的蛋白表达,VEGFA、ENOS阳性表达率均上升,IL-6和TNF-α水平均下降(P<0.05),抑制剂组创面愈合率,Wnt3a、β-catenin的蛋白表达,VEGFA、ENOS阳性表达率均下降,IL-6和TNF-α水平均上升(P<0.05)。结论 抑制miR-429的表达可促进慢性难愈合创面修复,该过程通过激活Wnt/β-catenin信号通路介导。

目的 基于Wnt通路分析Unc-51样激酶1(unc-51 like kinase 1,ULK1)对子痫前期大鼠胎盘滋养层细胞侵袭、迁移的影响。方法 建立子痫前期大鼠模型后从胎盘组织分离滋养层细胞,将子痫前期滋养层细胞随机分为4个实验组:阴性对照组、siRNA ULK1组、SKL2001组、siRNA ULK1+KYA1797K组。CCK8实验检测滋养层细胞的增殖活力;Transwell实验检测滋养层细胞的侵袭与迁移能力;流式细胞术检测滋养层细胞的凋亡率;蛋白质印迹法检测滋养层细胞中ULK1及Wnt通路蛋白的表达。结果 siRNA ULK1组、siRNA ULK1+KYA1797K组滋养层细胞的ULK1表达明显降低,而SKL2001组滋养层细胞的ULK1表达无明显变化。siRNA ULK1以及SKL2001组的滋养层细胞增殖活力升高,侵袭及迁移能力增强,凋亡率降低,Wnt3α、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达上调。siRNA ULK1+KYA1797K组滋养层细胞的增殖活力、侵袭、迁移能力、细胞凋亡率、Wnt3α和β-catenin以及c-Myc与Cyclin D1蛋白表达相较于阴性对照组无明显变化。结论 抑制ULK1表达后,子痫前期大鼠滋养层细胞的增殖、迁移与侵袭活性增加,凋亡率降低,该过程与Wnt/β-catenin信号通路激活相关。

目的 基于NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)/胱天蛋白酶-1(caspase-1)通路探讨细胞因子信号抑制物1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS-1)对肺炎克雷伯菌感染的A549细胞的影响。方法 人Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞)被分为4个实验组:siRNA NC组、siRNA SOCS-1组、pcDNA3.1 NC组、pcDNA3.1 SOCS-1组。经肺炎克雷伯菌感染3 h后使用siRNA NC(50 nmol/L)、siRNA SOCS-1(50 nmol/L)、pcDNA3.1 NC(20 nmol/L)、pcDNA3.1 SOCS-1(20 nmol/L)处理相应的A549细胞48 h。MTT实验及BrdU染色实验分析A549细胞的增殖活性;流式细胞术分析A549细胞的凋亡率;ELISA测定各组A549细胞培养基中炎症因子水平;蛋白质印迹实验检测A549细胞中SOCS-1、NLRP3、ASC、caspase-1蛋白的表达水平。结果 感染肺炎克雷伯菌能够导致A549细胞中的SOCS-1表达水平增加。与siRNA NC组比较,siRNA SOCS-1组的A549细胞增殖活性增加,凋亡率及炎症因子水平降低,NLRP3、ASC、caspase-1表达水平降低。与pcDNA3.1 NC组比较,pcDNA3.1 SOCS-1组的A549细胞增殖活性降低,凋亡率、炎症因子水平增加,NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平增加。结论 SOCS-1能够促进肺炎克雷伯菌感染的A549细胞的凋亡及炎症因子释放水平,并抑制A549细胞增殖,这一过程与SOCS-1调控NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路密切相关。

目的 探讨干扰长链非编码RNA lncRNA NCK1-AS1表达对甲状腺癌细胞CAL-62生长和侵袭的影响。方法 转染相应shRNA干扰CAL-62细胞中lncRNA NCK1-AS1表达,RT-PCR检测lncRNA NCK1-AS1表达水平。EdU染色检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡。RT-PCR检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、p21、生存素(Survivin)的mRNA表达水平。Transwell法检测细胞侵袭,微管形成实验检测微管样结构数。蛋白质印迹检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、E-钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、N-钙黏蛋白(neural cadherin,N-cadherin)表达水平。结果 与对照组比较,lncRNA NCK1-AS1干扰组细胞增殖率降低,凋亡细胞增多,PCNA和Survivin mRNA水平下调,p21 mRNA水平上调,侵袭细胞和微管样结构数减少,VEGF、N-cadherin蛋白表达下调,E-cadherin表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 干扰lncRNA NCK1-AS1表达能够抑制甲状腺癌细胞CAL-62生长和侵袭。

目的 分析丹皮酚对慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)诱导的抑郁症大鼠空间学习记忆和抑郁行为的影响,并探讨其作用机制。方法 通过CUMS诱导抑郁症大鼠模型并分为抑郁症组,丹皮酚低、中、高剂量组和Flu组,应激第3周时给予药物干预,持续1周;对照组大鼠不做处理。进行Morris水迷宫、糖水偏爱、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)和悬尾实验(tail suspension test,TST),检测血清CRH、ACTH、CORT水平及海马组织ERK/CREB蛋白表达。结果 与对照组比较,抑郁症组大鼠糖水偏爱度降低(P<0.05),逃避潜伏期延长,穿越平台次数及第三象限停留时间减少(P<0.05),FST及TST中不动时间增加(P<0.05),血清CRH、ACTH及CORT水平升高(P<0.05),海马组织p-ERK/ERK、p-CREB/CREB比值降低(P<0.05);与抑郁症组比较,中、高剂量丹皮酚组和Flu组上述指标均明显逆转(P<0.05)。结论 丹皮酚能改善CUMS诱导的抑郁症大鼠空间学习记忆能力和抑郁样行为,其机制与调节HPA轴以及激活ERK/CREB信号通路有关。

目的 探究白芍总苷对百草枯(PQ)诱导的大鼠肺损伤氧化应激和肺纤维化的影响及潜在作用机制。方法 腹腔注射PQ诱导大鼠肺损伤,给予不同剂量白芍总苷干预,观察肺组织病理改变、氧化应激、炎症因子水平和纤维化相关因子mRNA水平、TGF-β1/Smad3信号通路蛋白表达。RLE-6TN细胞进行PQ处理并给予白芍总苷干预,观察细胞TGF-β1/Smad3通路相关分子表达。结果 白芍总苷干预降低PQ大鼠肺损伤、MDA、HYP含量和血清TNF-α、IL-6、IL-1β、HYP含量,降低α-SMA、Collagen III、TIMP-1mRNA水平和TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达,增加SOD、CAT含量和p-Smad7/Smad7表达,有剂量效应。白芍总苷干预提高PQ中毒RLE-6TN细胞p-Smad7表达,降低TGF-β1、p-Smad3表达。结论 白芍总苷可改善PQ大鼠氧化应激及肺纤维化,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad3信号通路有关。

目的 探究利福平调控miR-28-5p/核转录因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号轴对肝细胞损伤的影响。方法 将L02细胞分为6组:对照组,利福平低、中、高剂量组,miR NC组,miR-28-5p inhibitor组;随后检测各组L02细胞的miR-28-5p表达水平、活力、凋亡率、炎症因子水平、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平。同时分析L02细胞中miR-28-5p与Nrf2的靶向关系。结果 L02细胞中的miR-28-5p表达水平随着利福平作用浓度的增加而增加。与对照组比较,利福平低、中、高剂量组与miR NC组和miR-28-5p inhibitor组的L02细胞的活力降低,凋亡率增加,炎症因子水平增加,MDA、AST及ALT水平增加,SOD与Nrf2水平降低。与miR NC组比较,miR-28-5p inhibitor组的L02细胞的活力增加,凋亡率降低,炎症因子水平降低,MDA、AST及ALT水平降低,SOD与Nrf2水平增加。miR-28-5p mimic能够靶向抑制Nrf2的表达。结论 利福平能够通过激活miR-28-5p抑制Nrf2的表达进而促进肝细胞损伤。

目的 探究罗哌卡因(ropivacaine)缓解卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的小鼠过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的作用机制。方法 小鼠随机分为对照组、AR组、Ropivacaine低剂量组(1 mg/kg)、Ropivacaine高剂量组(5 mg/kg)和地塞米松(Dex)阳性组(2 mg/kg),各5只。末次给药后进行指标评估。结果 Ropivacaine高剂量组和Dex组小鼠体质量高于AR组(P<0.05),相对脾脏质量,搓鼻、打喷嚏和流鼻涕次数,血清组胺、OVA特异性免疫球蛋白E(IgE)、总IgE、总IgG1和β-己糖胺酶水平,鼻灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-5水平及鼻黏膜组织p65、p-IkBα蛋白表达均低于AR组(P<0.05),嗜酸性粒细胞浸润减少。结论 高剂量罗哌卡因可缓解OVA诱导的AR小鼠鼻炎症状及鼻黏膜炎性浸润,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

目的 研究蒙药吉祥安坤丸对卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)大鼠的疗效及作用机制。方法 54只SD雌性大鼠随机分6组,除正常组外,其余用雷公藤多苷片建立POF模型,后各给药组灌胃相应药物36天。检测血清性激素、炎性因子、氧化应激指标,观察卵巢病理形态,检测PI3K/AKT/mTOR通路相关分子表达。结果 模型组性激素紊乱、炎性及氧化应激水平异常,卵巢结构损伤严重,PI3K/AKT/mTOR通路相关分子表达异常;蒙药各浓度组及西药组均有改善,高浓度组与西药组效果最显著,可调控PI3K/AKT/mTOR通路相关分子表达。结论 蒙药吉祥安坤丸可改善POF大鼠卵巢功能,机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR通路及mTOR蛋白磷酸化有关。

Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,Plk1)作为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的重要成员,是细胞周期调控的核心调控因子,其功能失调与肿瘤发生密切相关。近年来研究发现,Plk1在终末分化的神经元中异常表达,并与阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病的病理过程密切相关。尤其值得注意的是,Plk1在阿尔茨海默病、帕金森病等疾病中扮演着双重角色:它不仅通过驱动异常细胞周期重启直接介导神经元死亡,同时也参与调控自噬等神经保护过程。Plk1在神经退行性疾病中的复杂功能,特别是其看似矛盾的双重作用,为理解神经退行性病变机制及开发新的治疗策略提供了全新视角。

纳米孔测序作为一种创新的高通量测序技术,凭借其实时检测、长读长以及无需PCR扩增的独特优势,已成为基因组学研究和临床诊断领域的重要工具。近年来,该技术在测序速度和数据准确性方面取得了显著进步,极大地推动了基因组测序、转录组分析以及多组学整合研究的发展。然而,纳米孔测序仍面临信号噪声、数据处理复杂性及准确性提升的挑战。文章通过对纳米孔测序的基本原理与技术演进进行综述,重点探讨其在基因组测序、转录组分析及临床应用中的最新进展,深入分析了现阶段存在的技术瓶颈及未来的发展方向,为相关科研人员提供全面的理论支持和实践指导,进一步推动纳米孔测序技术在生命科学和医学领域的广泛应用。