医学分子生物学杂志 ›› 2023, Vol. 20 ›› Issue (5): 450-454.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2023.05.012
摘要: 目的 探究 β-catenin 蛋白 H36P 突变对肝癌细胞的增殖的影响。 方法 通过 PCR 扩增法扩增 CTNNB1 基因, 包括 WT-CTNNB1、 G34R-CTNNB1 和 H36P-CTNNB1。 通过双酶切法克隆至 p-CMV5 质粒载 体, 将相对应的质粒瞬转至 Huh7、 HepG2 细胞中, 并检测其蛋白表达情况。 其次, 使用 CHX 按时间梯度 处理表达目的基因的细胞, 比较 H36P-β-catenin 与 WT-β-catenin、 G34R-β-catenin 的泛素化降解情况并分析 蛋白稳定性。 随后通过质核分离检测 H36P-β-catenin 核转位能力。 最后, 通过 CCK-8 计数法检查 H36P-β-catenin 对肝癌细胞增殖能力的影响。 结果 突变体 G34R、 H36P 的蛋白质表达水平, 与野生型 β-catenin 无 明显差异。 在 HepG2 细胞株中, CHX 作用 8 h 时 WT-β-catenin 几乎完全降解, 而 G34R 和 H36P 只降解了 75 % 和 60 % 。 Huh7 细胞株中的情况类似, 6 hrs 时 WT-β-catenin 几乎完全降解, 而 G34R 和 H36P 只降解 了约 40 % 。 以上结果差异均具有统计学意义 (P< 0. 05)。 相较于 WT-β-catenin, G34R 和 H36P 促使 HepG2 细胞增殖量提升。 在表达 β-catenin 突变体的肝癌细胞泛素化降解受抑制的情况下, 与 WT-β-catenin、 突变 体 G34R 相比, 表达突变体 H36P 的肝癌细胞核转位明显增加。 结论 β-catenin 蛋白 H36P 突变蛋白表达稳 定、 核转位情况增多, 泛素化降解过程受阻, 并能促进 HepG2 和 Huh7 肝癌细胞的增殖。
中图分类号: