医学分子生物学杂志 ›› 2024, Vol. 21 ›› Issue (2): 108-114.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2024.02.003
摘要: 目的 探究 PKM2 拟素化 (neddylation) 修饰对肺动脉高压大鼠右心室纤维化的影响。 方法 将SD 大鼠随机分为对照组、 模型组和 MLN4924 组, HE 染色法检测肺动脉, Masson 染色检测右心室纤维化程度。 提取大鼠原代心脏成纤维细胞, 免疫荧光法检测 α-平滑肌肌动蛋白 ( α-SMA) 表达, 使用 si-NC、 siPKM2、 pcDNA3. 1-PKM2 转染原代心脏成纤维细胞后, 蛋白质免疫印迹法检测 PKM2 及纤维化相关Ⅰ 型胶原蛋白 (Collagen Ⅰ )、 Ⅲ 型胶原蛋白 ( Collagen Ⅲ )、 基质金属蛋白酶 2 ( MMP2)、 基质金属蛋白酶 9(MMP9) 等蛋白水平。 蛋白质免疫共沉淀法检测 PKM2 neddylation 修饰。 实时荧光定量 PCR 法检测大鼠心脏组织中 PKM2 的 mRNA 表达水平。 蛋白质免疫印迹法检测 PKM2 蛋白质降解时间。 结果 HE 染色结果显示, 模型组肺小动脉 (纤维层) 和内膜 (内转运蛋白) 之间的距离显著加宽, 中间层的厚度增加, Masson染色显示, 与对照组相比, 模型组显示更多的胶原沉积, 纤维化更严重的。 模型组的 PKM2 蛋白表达水平高于对照组, 而 mRNA 水平无显著性差异。 PKM2 在大鼠肺动脉高压模型中右心室组织存在 neddylation 修饰。 在心脏成纤维细胞中敲低 Nedd8 或用 MLN4924 抑制 neddylation 修饰可下调 PKM2 及纤维化相关蛋白Collagen Ⅰ 、 Collagen Ⅲ 、 MMP2、 MMP9 等蛋白水平, 促进 PKM2 蛋白质降解速率 [ (3. 03 ± 0. 23) ~(11. 97 ± 0. 66) h, t = - 12. 82, P< 0. 001, 过表达 Nedd8 则提高 PKM2 蛋白表达。 MLN4924 组大鼠右心室纤维化程度及 α-SMA 蛋白表达水平低于模型组。 结论 在肺动脉高压大鼠模型中, neddylation 修饰增强了PKM2 的蛋白质稳定性进而促进右心室纤维化过程。
中图分类号: