摘要： 摘要:目的 探讨TRiC/CCT复合体(TCP-1ringcomplex/chaperonincontainingTCP-1)与mTOR复合体1 (mTORC1)之间可能的相互调控机制。方法 采用免疫共沉淀技术和Westernblot技术探究TRiC/CCT复合体与 mTORC1之间的相互作用;使用雷帕霉素抑制mTORC1活性后,制备可溶性及不溶性细胞蛋白样本,比较受CCT辅助 折叠的蛋白表达水平变化;通过非变性凝胶电泳技术观察TRiC/CCT复合体的变化,探究mTORC1对TRiC/CCT复合 体完整性的影响;利用慢病毒介导的shRNA静默HEK-293T细胞中的CCT2或CCT5基因,研究TRiC/CCT复合体对 mTORC1关键组分表达及下游底物磷酸化水平的影响。结果 免疫共沉淀实验证实TRiC/CCT复合体各亚基与 mTORC1均存在相互作用;雷帕霉素抑制mTORC1活性后,β-actin、β-Tubulin及STAT3不溶性蛋白表达量无明显增 加,且在非变性电泳凝胶中复合体分子大小无明显改变,证明mTORC1对TRiC/CCT复合体的形成不存在调控作用; 在HEK-293T中静默CCT2或CCT5后,mTOR、Raptor、mLST8蛋白表达水平降低,且磷酸化的p70S6K及Akt水平降 低,证实TRiC/CCT复合体对mTORC1及下游分子具有调控作用。结论 TRiC/CCT复合体通过调控mTORC1各组 分的蛋白表达水平,进而影响其下游底物的磷酸化水平及活性状态。

中图分类号: 

• R341.9