摘要： 摘要:目的 构建 MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得 MR1/IgG1Fc二聚体, 制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定 T细胞(MAIT)反应性代谢物及 MAIT细胞功能调控研究。方法 从人外周 血单个核细胞中扩增β2m 编码基因。商业化合成 MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因 MR1/IgG1Fc,与β2m 基因重组构建pFastBacTM Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用 Bac-to-Bac昆虫表达系统表达 MR1/IgG1Fc二 聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Westernblot及流式细胞术进行检测。建立 MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工 抗原提呈细胞(artificialantigenpresentingcells,aAPCs),即 MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人 外周血单个核细胞共培养,检测 MAIT 细胞的活化和增殖水平。结果 经 PCR 及测序鉴定证实 pFastBacTM Dual+ [β2m+MR1/IgG1Fc]载体中 MR1/IgG1Fc与β2m 具有正确序列。ELISA、Westernblot及流式细胞术检测结果表明 MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载 DH5α来源代谢物的 MR1aAPCs 能够促进 MAIT细胞活化和增殖。结论 成功构建 pFastBacTM Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在 Sf9细胞 中表达 MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得 MR1aAPCs,为研究 MAIT细胞反应性代谢物及 MAIT细胞功能提供了新的工具。

关键词: 黏膜相关恒定 T细胞, MR1/IgG1Fc二聚体, 人工抗原提呈细胞, 反应性代谢物 ,

中图分类号: 

• R392.9