摘要： 摘要:目的 探讨重楼皂苷 D(polyphyllinD,PPD)抑制多形性胶质母细胞瘤(glioblastomamultiforme,GBM)恶性 生物学行为的分子机制。方法 使用的细胞模型为 DBTRG-05MG(DBTRG)和 A172细胞株。将 PPD 处理后的细胞, 通过 MTT实验、实时无标记细胞分析技术(real-timecellularanalysis,RTCA)和集落形成实验检测 PPD 对细胞存活能 力的影响;流式细胞术、DAPI染色、Westernblot检测 PPD 对细胞凋亡的影响;Transwell细胞侵袭实验和 RTCA 测定 PPD对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验和高内涵成像分析系统测定PPD对细胞迁移能力的影响;Westernblot测定 PPD所导致的 Hippo信号通路相关蛋白质的表达以及蛋白质的磷酸化水平的变化;通过 Caspase-3抑制剂(Z-DEVDFMK,Z-DEVD)与 PPD共处理明确 Caspase-3对 MST1的激活作用;利用分子对接研究 PPD 与 Caspase-3在三维空间 的相互作用;通过靶点稳定性药物亲和反应实验明确 PPD 与 Caspase-3的直接结合。结果 PPD 对 GBM 细胞的增殖 具有显著的抑制能力。PPD能够诱导 GBM 细胞发生凋亡。PPD 处理组的 GBM 细胞侵袭、迁移能力显著下降。PPD 能够下调 YAP蛋白及其下游靶基因 Cyr61、c-Myc的转录,促进 YAP上游信号分子 LATS1、MST1的磷酸化,表明 PPD 能够激活 GBM 细胞中的 Hippo信号通路。Z-DEVD 能够拮抗 PPD 对 MST1的磷酸化,表明 PPD 通过激活 Caspase-3 进而激活 Hippo信号通路。分子对接模拟发现 PPD能够在 C-末端区域与 Caspase-3结合;基于靶点稳定性的药物亲和 反应实验表明 PPD阻碍了蛋白酶pronase对 Caspase-3的水解作用,表明PPD与 Caspase-3具有直接结合作用。结论 PPD通过靶向 Caspase-3激活 Hippo信号通路抑制 GBM 细胞增殖、侵袭和迁移并诱导凋亡。 

关键词: 重楼皂苷 D, 多形性胶质母细胞瘤, Caspase-3, Hippo通路 ,

中图分类号: 

• R739.41