医学分子生物学杂志 ›› 2022, Vol. 19 ›› Issue (3): 192-199.doi: 10.3870/j.issn.1672-8009.2022.03.003
摘要: 目的 分析 miR-495-3p / Wnt 抑制因子 (Wnt inhibitor factor 1, WIF1) / Wnt 信号通路轴调节视网 膜母细胞瘤 (retinoblastoma, RB) 细胞增殖、 迁移和侵袭。 方法 生物信息学分析 WIF1 的差异表达及与 临床不良表型之间的关系, 并预测 miRNA 靶标; 双荧光酶素报告实验验证。 构建稳定过表达 WIF1 的 RB 细胞 (Vector 组、 WIF1 组)。 构建稳定过表达 miR-495-3p 的 RB 细胞 (miR-NC 组、 miR-495-3p 组和 miR495-3p + WIF1 组)。 Western 印迹检测 WIF1 蛋白及 Wnt 通路相关蛋白表达, 并进行体外功能试验。 裸鼠移 植瘤实验分析移植瘤体积重量。 免疫组化分析 WIF1 在 RB 组织中水平。 结果 WIF1 低表达, 与迁移、 侵袭 有关, 为 miR-495-3p 靶标, 双荧光酶素报告实验证实 WIF1 是 miR-495-3p 作用靶点。 WIF1 过表达抑制细胞增 殖、 迁移和侵袭, 影响细胞周期, 诱导凋亡。 体内实验显示 WIF1 在 RB 组织中过表达, 其过表达抑制瘤体生 长。 过表达 WIF1 下调 β-catenin、 c-Myc 蛋白水平 (P< 0. 05)。 过表达 miR-495-3p 下调 WIF1 蛋白水平, 上调 β-catenin 和 c-Myc 蛋白水平, 促进细胞增殖迁移、 迁移和侵袭, 抑制细胞凋亡 (P< 0. 05), 增加 WIF1 表达 可逆转 miR-495-3p 的作用 (P< 0. 05)。 结论 miR-495-3p 靶向 WIF1 通过 Wnt 信号通路抑制 RB 细胞增殖、 迁移和侵袭, 并诱导凋亡。
中图分类号: