摘要： 目的 评 价 基 于 噬 菌 体 展 示 技 术 的 羟 基 磷 灰 石 结 合 肽 的 解 吸 附 特 征。方 法 采 用 成 品 羟 基 磷 灰 石 (hydroxyapatite,HAP)作为结合底物,通过 X射线衍射(X-raydiffraction,XRD)对其进行物相鉴定,提取噬菌体 DNA 测 序读取展示肽 的 序 列,扩 增 制 备 目 标 序 列 YSLHWGE(YSL)的 单 克 隆 储 液,以 肽 库 中 随 机 挑 选 的 序 列 VTDSKPK (VTD)为阴性对照;滴度测试测定投入回收比,免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力。参照标准淘选方案,在不同 pH 值(7.5、6.5、5.5、4.5)缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征。结果 YSL和 VTD 的单克隆储液扩增后滴度均 达到1011pfu/10μL,符合后续实验要求。测序结果得到目标序列和随机序列分别为 YSL和 VTD。通过重复3次滴度 测试计算投入回收比发现,目标序列 YSL与 HAP的亲和度较高,投入回收比为随机肽 VTD投入回收比的17.5倍。这 种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证,结果显示 YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均吸光度分 别为(71.98±2.30)% 和 (0.10090±0.00544),均 显 著 高 于 VTD 组 的 (49.95±2.28)% (P<0.01)和 (0.04637± 0.00117)(P<0.01);发现在不同pH 值环境中,YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽 VTD 解吸附的比例(P<0.01)。结论 羟基磷灰石结合肽序列 YSLHWGE 对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有 一定的随环境pH 值变化的缓释能力。 

关键词: 羟基磷灰石, 羟基磷灰石结合肽, 蛋白质吸附, 滴度测试 中

中图分类号: 

• R783.1