摘要： 摘要:目的 探究人乳头瘤病毒16E7(HPV16E7)通过调控细胞内 miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从 miRNA 的视角探讨高危型 HPV 的致癌机制。方法 将 HPV16E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质 粒及空载质粒分别转 染 人 前 列 腺 癌 细 胞 PC3;通 过 半 定 量 RT-PCR 检 测 细 胞 周 期 相 关 基 因 及 miR-29a潜 在 靶 基 因 CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定 miR-29a的靶基因;将 miR-29amimic及inhibitor分别瞬时转染 PC3-E7和 PC3-3.1细胞,Westernblot检测 CDK6蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期分布。结果 与对照组相比,克 隆细胞株 PC3-E7中 CDK4、CDK6、CyclinE2、E2F1等细胞周期相关调节因子及 miR-29a的潜在靶基因 HBP1、CDK6等 表达均有不同程度的上调(均P<0.01);而 PC3-E7细胞中 CDK6蛋白表达水平亦明显高于对照组(P<0.01);miR-29a 通过靶向3'-UTR区域调控 CDK6基因转录和蛋白表达,E7高表达后下调了 miR-29a的表达水平,使得 CDK6表达升 高,而加速细胞周期 G1期向S期进展。上调 miR-29a后可以抑制 CDK6的表达,并调控下游细胞周期,部分逆转 E7的 促增殖效应。结论 miR-29a与 CDK6mRNA3'UTR结合并下调其表达,从而抑制细胞的增殖,E7-miR-29a-CDK6信 号通路可能是高危型 HPV 致细胞发生恶性增殖的重要途径。 

关键词: 人乳头瘤病毒16E7, miR-29a, CDK6, 细胞增殖 ,

中图分类号: 

• R737.2