miR-3133通过靶向 HAS2促进人脐静脉内皮细胞自噬抑制血管生成对布加综合征的影响
张兴海, 庄 玉, 姜 敏, 陈颜夙, 孙桂香
华中科技大学学报(医学版). 2023, 52(4):
503-510.
doi:10.3870/j.issn.1672-0741.2023.04.011
摘要
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多维度评价
摘要:目的 探索 miR-3133通过靶向透明质酸合成酶2(HAS2)促进细胞自噬,抑制血管生成,从而影响布加综合
征中隔膜形成的作用,为布加综合征的病因研究提供新的线索,寻求潜在的治疗方法。方法 利用透射电镜观察人脐静
脉内皮细胞(HUVECs)内自噬小体的数量,使用细胞自噬染色检测试剂盒,通过 MDC 法对细胞进行荧光染色,在荧光
显微镜下观察自噬性死亡的细胞数量。通过 Westernblot实验检测自噬标志蛋白 p62和 LC3的表达改变,从而验证
miR-3133促进自噬的作用。通过 CCK-8实验检测细胞的增殖能力变化,管状形成实验检测细胞形成管道能力的变化,
从而验证 miR-3133通过促进自噬抑制血管生成。利用生物信息学软件 miRanda进行预测,找到有可能成为 miR-3133
靶向调控对象的下游基因。转染 miR-3133后使用 Westernblot检测 HAS2的蛋白表达改变,从而验证 miR-3133能够
靶向负调控 HAS2。在使用小干扰 RNA 后,检测 HUVECs的增殖能力和血管形成能力变化以及自噬标志蛋白表达的
改变,从而验证 miR-3133是通过靶向 HAS2促进自噬抑制血管形成。结果 透射电镜结果显示转染 miR-3133mimic
的细胞比其阴性对照具有更多的自噬体。在荧光显微镜下 mimic组中出现更多的 MDC染色;与对照组相比,在inhibitor组中观察到相对较少的 MDC染色。CCK-8实验表明,miR-3133mimic减弱了 HUVECs的增殖,而 miR-3133inhibitor促进了 HUVECs的增殖。与各对照组相比,miR-3133mimic组 p62蛋白表达显著下调,而 miR-3133inhibitor组表
达增加,mimic组 LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ 比值增加,而inhibitor组降低。Westernblot结果显示,与各自的对照组相比,miR3133mimic组中的 HAS2表达受到抑制,而 miR-3133inhibitor组中的表达上调。然而,miR-3133未能在 mRNA 水平上
显著调节 HAS2的表达。HUVECs敲除 HAS2后,p62蛋白表达明显降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高。与阴性对照组相
比,HAS2敲除组的 HUVECs细胞增殖率和血管形成率显著降低。结论 miR-3133可以通过靶向 HAS2的表达,促进
细胞自噬抑制血管生成,进而参与影响布加综合征。