摘要： 摘要:目的 观察 miR-519d在结肠癌细胞系中的表达,及对结肠癌细胞系增殖、凋亡及侵袭的影响,并探索其机制。 方法 通过实时荧光定量 PCR技术(qRT-PCR)检测人正常结肠黏膜上皮细胞系 NCM460和结肠癌细胞系 HCT116、 SW620、LOVO、HT29中 miR-519d的表达差异。将结肠癌细胞系 SW620分为3组,即 miR-519d过表达组(miR-519d 组)、阴性对照组(miR-NC组)及空白对照组(Blank组),采用 LipofetamineTM3000分别转染 miR-519dmimics及阴性对 照序列(Scramble),Blank组仅给予空白对照。采用 MTT 法测定细胞增殖能力,采用 PI/Annexin Ⅴ-FITC双染和流式 细胞术测定细胞凋亡能力,采用 Transwell法测定细胞侵袭能力。蛋白印迹法测定信号转导及转录激活因子3(STAT3) 和 X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达变化。结果 结肠癌细胞系 HCT116、SW620、LOVO 和 HT29的 miR-519d相对 表达量均低于正常结肠黏膜上皮细胞系 NCM460(均 P<0.05)。转染24h后,miR-519d组 miR-519d相对表达量高于 miR-NC组(t=43.060,P<0.01),Blank组与 miR-NC组差异无统计学意义。MTT实验显示,细胞铺板72h及96h时 miR-519d组细胞增殖能力明显低于 miR-NC组(均P<0.05),Blank组与 miR-NC 组差异无统计学意义。miR-519d组 细胞凋亡率高于 miR-NC组[(23.65±1.23)%vs.(4.96±0.63)%,P=0.002],miR-NC组与 Blank组细胞凋亡率差异 无统计学意义。miR-519d组侵袭细胞数少于 miR-NC组[(55±8)vs.(137±14),P=0.003],Blank组与 miR-NC组侵袭 细胞数差异无统计学意义。miR-519d组 XIAP 蛋白相对表达量低于 miR-NC 组[(0.32±0.04)vs.(1.0±0.05),P< 0.01],Blank组与 miR-NC组 XIAP蛋白表达量差异无统计学意义。miR-519d组STAT3蛋白相对表达量低于 miR-NC 组[(0.44±0.04)vs.(1.05±0.07),P<0.01],Blank组与 miR-NC组STAT3蛋白表达量差异无统计学意义。结论 miR519d过表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭,并促进其凋亡,其作用机制可能与STAT3和 XIAP蛋白表达下调有关。 

关键词: miR-519d, 结肠癌, 增殖, 凋亡, STAT3, X连锁凋亡抑制蛋白

中图分类号: 

• R735.35