摘要： 摘要:目的 构建携带酪氨酸酶基因(tyrosinase,TYR)和脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor, BDNF)基因的重组慢病毒载体,建立 TYR和 BDNF基因过表达的骨髓间充质干细胞株(BMSCs),并利用光学成像技术 监测 BMSCs在大鼠脑梗死模型脑内分布情况。方法 应用 RT-PCR技术扩增 TYR及 BDNF基因,然后克隆到 H7656 载体,构建慢病毒表达载体 H16189,转染293T细胞,包装并测定其滴度,转染BMSCs后,应用 RT-PCR、Westernblot和 ELISA 检测目的基因及蛋白的表达。构建大鼠大脑中动脉梗塞模型,纹状体注射慢病毒感染的 BMSCs,小动物光学成 像观察 BMSCs脑内分布情况。结果 成功构建慢病毒表达载体 H16189(PLENTI-CBH-TYR-3XFLAG-P2A-LUC2- TCMV-BDNF-6XHIS-F2A-PURO-WPRE),病 毒 滴 度 为 2.6×108TU/mL。慢 病 毒 感 染 BMSCs后,RT-PCR 检 测 到 TYR和BDNFmRNA 的表达,Westernblot或 ELISA 法成功检测到 TYR和BDNF蛋白表达。光学成像结果显示BMSCs可以在脑内迁徙,且主要聚集在脑梗死区域。结论 成功构建了携带 TYR 及 BDNF基因的慢病毒表达载体,光学 成像显示携带 TYR及BDNF基因的BMSCs可以将重组质粒运输到缺血梗死区,为下一步进行 MRI显像及疗效评价提 供了实验依据。 

关键词: 骨髓间充质干细胞, 酪氨酸酶基因, 脑源性神经营养因子, 脑梗死

中图分类号: 

• R743.3