摘要： 摘要:目的 聚焦miR-93与线粒体融合蛋白2(MFN2)的调控关系,探讨其通过调节内质网应激(ERS)和线粒体功 能对急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)肺纤维化的影响。方法 通过脂多糖(LPS)诱导 人胚肺成纤维细胞(HFL-1)构建ARDS肺纤维化细胞模型,结合miR-93抑制剂与MFN2干扰质粒(si-MFN2)进行功能 验证及机制研究,分为inhibitorNC组(转染inhibitorNC)、miR-93inhibitor组(转染miR-93inhibitor)、miR-93inhibitor +si-NC组(转染miR-93inhibitor和si-NC)和miR-93inhibitor+si-MFN2组(转染miR-93inhibitor和si-MFN2); ELISA及Westernblot检测细胞上清中的Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)含量;qRT-PCR检测miRNAs及MFN2表 达;CCK-8实验检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Westernblot检测内质网应激相关蛋白(Bip/GRP78、IRE1)及 线粒体自噬相关蛋白(Beclin-1)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测miR-93与MFN2的靶向调控关系。结果 予以 LPS诱导人胚肺成纤维细胞,LPS组COLⅠ含量较对照组明显增加(P<0.01),提示ARDS肺纤维化体外细胞模型构建 成功;miR-93inhibitor组较inhibitorNC组MFN2表达显著上调,且HFL-1细胞增殖活性下降、细胞凋亡率增加,肺组 织纤维化标志物COLⅠ分泌减少(均P<0.01);双荧光素酶报告基因实验证明了miR-93与MFN2靶向结合;此外, miR-93inhibitor组较inhibitorNC组ERS标志物(Bip/GRP78、IRE1)表达下调,线粒体自噬相关蛋白(Beclin-1)的表达 上调(均P<0.01);同时转染miR-93inhibitor及干扰MFN2后可抑制这种效应,与miR-93inhibitor组比较,miR-93in hibitor+si-MFN2组细胞增殖活性抑制作用减弱,COLⅠ分泌增加,且ERS标志物(Bip/GRP78、IRE1)表达上调,线粒体 自噬相关蛋白(Beclin-1)表达下调。结论 抑制miR-93通过靶向上调MFN2表达,维持线粒体相关内质网膜(mito chondria-associatedendoplasmicreticulummembrane,MAM)动态平衡,抑制ERS并促进线粒体自噬,最终减轻ARDS肺 纤维化进程。 

中图分类号: 

• R563.8